通常來(lái)說(shuō)國(guó)產(chǎn)顯微鏡與進(jìn)口顯微鏡有如下不同之處:
1、 價(jià)格, 國(guó)產(chǎn)顯微鏡價(jià)格低廉, 一般從幾千到幾萬(wàn)價(jià)格不等, 比較適合檢驗(yàn)要求不高,
設(shè)備資金有限的中小企業(yè)。 進(jìn)口顯微鏡通常是從幾萬(wàn)到幾十萬(wàn), 因廠家和型號(hào)的不同價(jià)格變
化較大, 主要使用于檢驗(yàn)要求較高采購(gòu)資金比較充裕的中大型企業(yè)。
2、 產(chǎn)品質(zhì)量, 雖然國(guó)產(chǎn)設(shè)備還在發(fā)展進(jìn)步, 但真實(shí)的講產(chǎn)品質(zhì)量和技術(shù)方面與國(guó)外進(jìn)
口的差距還是很大的, 個(gè)人認(rèn)為短期內(nèi)是無(wú)法追趕上了。
3、 光學(xué)系統(tǒng): 國(guó)產(chǎn)顯微鏡大多數(shù)采用的是有限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng), 因此產(chǎn)品的功能都比較簡(jiǎn)
單, 部分**產(chǎn)品采用的是無(wú)限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng), 但相關(guān)技術(shù)還不是很成熟。 進(jìn)口廠家采用的都
是無(wú)限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng), 其中德國(guó)蔡司公司的 ICCS 光學(xué)系統(tǒng)**為先進(jìn)。 激光掃描共聚焦顯微鏡哪個(gè)牌子的好?浙江**顯微鏡聯(lián)系方式
4. 雙光子激發(fā)的優(yōu)點(diǎn)是什么?
1) 增加了染料的選擇性: 共聚焦系統(tǒng)的激光器(Ar, Ar/Kr, HeNe) 的激發(fā)光范圍在 488nm - 647nm
。 這就意味著想用紫外激發(fā)熒光染料的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行, 例如使用 DAPI , Hoescht
。 而雙光子的激發(fā)波長(zhǎng)是單光子的兩倍, 所以紫外激發(fā)的染料能被近紅外光激發(fā)。
2) 減少光漂白: 因?yàn)楣馄诇p少的減少使得用 CFP/YFP 做熒光共振能量轉(zhuǎn)移( FRET ) 的實(shí)驗(yàn)的成功率提
高。
3) 無(wú)需特殊的物鏡: 從硬件的角度出發(fā), 用近紅外光的波長(zhǎng)激發(fā)紫外激發(fā)染料不需要特殊的紫外光學(xué)組件。
4) 提高信噪比: 激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng)具有很大的差別, 提高了信噪比。
5) 漂白局限于焦點(diǎn)處: 因?yàn)闊晒饧ぐl(fā)只發(fā)生在物鏡的焦點(diǎn)上, 所以就不需要共聚焦了。 這樣提高了光
的檢測(cè), 而且光漂白只發(fā)生在焦點(diǎn)上。
6) 更容易穿透標(biāo)本: 紅外波長(zhǎng)的光不易被細(xì)胞散射, 能穿透更深的標(biāo)本。 浙江官方顯微鏡公司激光掃描共聚焦顯微鏡維修保養(yǎng)。
3. 雙光子顯微鏡的激光器有何特別之處?
雙光子吸收幾率依賴于兩個(gè)入射光子在空間和時(shí)間上的重合程度(兩個(gè)光子必須在 10-18 秒內(nèi)到達(dá)) 。 雙
光子吸收截面很小, 只有在具有很大光子流量的區(qū)域的熒光團(tuán)才會(huì)被激發(fā)。 因此所用激光器多為鈦寶石激
光器, 可以達(dá)到皮秒或者飛秒級(jí)的掃描速度, 且具有非常高的峰值功率和較低的平均功率, 從而可以減小
或者消除光漂白和光毒作用。 **主要的是在一個(gè)很小的范圍提供非常高密度的光子, 可以保證雙光子的同
時(shí)激發(fā)。
AFM 是利用在不導(dǎo)電的探針和樣品之間存在的與樣品表面起伏所對(duì)應(yīng)的原子力來(lái)調(diào)制
顯示器的灰度。 其設(shè)計(jì)思想為: 將探針裝在對(duì)力敏感的彈力臂端頭上, 探針靠近樣品時(shí), 其
針頭上的原子與樣品原子之間會(huì)產(chǎn)生各種不同的相互作用力。 一般來(lái)說(shuō), 間隙縮小時(shí), 會(huì)產(chǎn)
生范德瓦爾斯吸力, 引力增大。 繼續(xù)縮小間隙時(shí), 探針針頭及樣品表面的電子則會(huì)產(chǎn)生靜電
斥力。 靜電斥力的增長(zhǎng)速度比范德瓦爾斯吸引力更高。 此后, 可以通過(guò)檢測(cè)微懸臂的形變量
來(lái)檢測(cè)樣品表面的原子排布信息。
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掃描探針顯微鏡的局限及未來(lái)發(fā)展
掃描探針顯微鏡發(fā)展至今已大體成熟, 但是仍有許多有待完善的地方。例如移動(dòng)樣品時(shí),
對(duì)樣品進(jìn)行掃描檢測(cè)的面積并不大, 樣品在較大范圍移動(dòng)時(shí)測(cè)量的進(jìn)度不是很高等。 同時(shí),
SPM 的發(fā)展時(shí)間并不是很長(zhǎng), 因此缺少了相關(guān)的方法標(biāo)準(zhǔn)和操作規(guī)范。
1.探針針尖
探針針尖的工藝研究探針的針尖對(duì)于掃描探針顯微鏡的分辨率十分重要。好的針尖設(shè)計(jì)
不僅能提高其分辨率, 對(duì)于整體的顯微鏡使用壽命的提高也起著很重要的作用。
2.提高獲得樣品表面圖像的時(shí)間
由于 SPM 是集掃描、 數(shù)據(jù)收集、 數(shù)據(jù)處理、 計(jì)算、 模擬為一體的結(jié)構(gòu), 因此從開(kāi)始掃描
到**終獲得圖像的時(shí)間是比較長(zhǎng)的, 未來(lái)可能會(huì)提高其顯示成像的時(shí)間。
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發(fā)射光子的能量小于被吸收的光子,因此熒光的波長(zhǎng)比激發(fā)光的波長(zhǎng)要長(zhǎng)。熒光顯微鏡利用了熒光發(fā)射光波長(zhǎng)比吸收光波長(zhǎng)較長(zhǎng)這一重要原理,通過(guò)光路設(shè)計(jì),分開(kāi)激發(fā)光和發(fā)射光,大幅降低了成像的背景。結(jié)合靈敏的檢測(cè)器件,在優(yōu)化條件下,熒光顯微鏡還可以檢測(cè)單個(gè)熒光分子發(fā)出的極其微弱的熒光,成為單分子成像的比較好選擇,其發(fā)展也奠定了這次諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的半壁江山。除了低背景和高靈敏度,熒光顯微鏡還通過(guò)對(duì)特定分子進(jìn)行標(biāo)記,具備很高的特異性。這一系列特點(diǎn)使得熒光顯微鏡成為生物學(xué)研究中**常用的一種光學(xué)顯微鏡。超分辨率熒光顯微技術(shù)通過(guò)應(yīng)用一系列物理原理、化學(xué)機(jī)制和算法“突破”了光學(xué)衍射極限,把光學(xué)顯微鏡的分辨率提高了幾十倍,使我們能以前所未有的視角觀察生物微觀世界。目前的超**辨率熒光顯微技術(shù)大體可分為兩類,一類通過(guò)調(diào)制照明光斑縮小系統(tǒng)的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)超分辨成像,主要貢獻(xiàn)者包括這次諾貝爾獎(jiǎng)得主StefanHell以及MatsGustafsson;另一類則是基于單分子定位的超分辨技術(shù),主要貢獻(xiàn)者包括這次諾貝爾獎(jiǎng)得主EricBetzig、W.E.Moerner以及哈佛大學(xué)莊小威教授和SamuelHess。 浙江**顯微鏡聯(lián)系方式
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