1） 問題： 蛋白無法吸附到微球上。
解決方法： 加入更多的蛋白； 去除微球中的表面活性劑， 釋放其占據的蛋白結合位點； 引入
中間物， 將微球與蛋白相連； 改變緩沖液。
2） 問題： 標記時加入了大量的蛋白， 但是仍然無活性。
解決方法： 改變蛋白加入量， 從而改變蛋白與微球結合的空間構象； 使用表位稀釋物， 占據
微球上的部分蛋白結合位點， 防止蛋白靠的太近。
3） 問題： 清洗去除未吸附蛋白后， 微球聚集。
解決方法： 增加蛋白標記量或封閉劑的用量， 防止有空余位點；
4） 問題： 標記后開始活性很好， 儲存一段時間后， 活性降低。
解決方法： 降低儲存溫度到 2~8 度； 降低儲存液中的封閉劑濃度， 防止抗體被替換； 確認
儲存液中無能與抗體競爭的雜質， 防止長時間取代抗體。 彩色微球有沒有必要買？山西原裝進口微球需要多少錢
4.
微球包被抗體后， 加入表面活性劑或者去污活性成分， 可能會導致抗體脫落。 如果是共價結合到微球
上， 共價結合的抗體就不會有脫落現(xiàn)象發(fā)生。 封閉蛋白， 像 BSA， casein 或 gelatin 可以用來封阻任何空余
的疏水性位點， 防止微球發(fā)生非特異性凝集。 但是表面活性劑可以將那些共價結合不牢固的抗體洗脫下來。
5.
此試劑和水反應， 因此， 溶解后應立刻使用掉。
6.
EDC 的用量， 根據微球表面羧基濃度來計算。根據計算所需量， 每 mol 的羧基應該再多加 2~3mol 的 EDC。
但是， 根據功能性檢測結果， 還需要進一步的優(yōu)化。 江蘇**微球廠家彩色微球正確安裝方法，你知道嗎？
3.
離心或超濾， 用等體積的包被緩沖液清洗兩次微球， 懸浮在包被緩沖液中。 (Note 3) .
4.
用包被緩沖液溶解抗體到 1mg/mL， 包被緩沖液 pH7~9， 濃度為 50mM~100mM。 (Note 1)
5.
將抗體快速加入的攪拌中的微球懸液中， 持續(xù)攪拌， 室溫孵育 2~5 小時。 (Note 2) .
6.
每 ml 反應溶液中加入 2. 5ul 的乙醇胺， 持續(xù)攪拌并室溫孵育 10 分鐘。 (Note 9) .
7.
離心或超濾， 用儲存緩沖液懸浮， 重復兩次， 移除未結合的抗體和乙醇胺。 (Note 3 and 4)
B2. NHS 中間活化酯兩步法
在此方法中， 在 EDAC 存在下， NHS 通過與微球上的羧基反應形成中間活化酯。 活化酯比 EDC 更穩(wěn)定， 不易水
解。
應用時先把針對不同檢測物的編
碼微球混合再加入微量待檢樣本在懸液中靶分子與微球表面交聯(lián)的分子進
行特異性地結合在一個反應孔內可以同時完成多達 100 種不同的生物學反應。
用 Luminex?100 進行分析儀器通過兩束激光分別識別編碼微球和檢測微
球上報告分子的熒光強度。因為分子雜交或免疫反應是在懸浮溶液中進行檢
測速度極快而且可以在一個微量液態(tài)反應體系中同時檢測多達 100 個指標。
流式熒光技術優(yōu)點1、高通量*需微量樣本(10μ l)1 次檢測**多 100
個指標2、高速度**快可達 10000 測試/小時3、低成本流式熒光聯(lián)檢的
試劑用量少能有效降低臨床應用的試劑成本4、靈敏度高檢測低限可達
10pg/ml5、重復性好每個指標有 5000 個反應單元分析 100 次取平均值
6、線性范圍廣檢測范圍達 6 個數量級7、無需洗滌減少誤差來源且操
作簡便、省時省力。**認證1997 年Clinical Chemistry 雜志刊登專文介
紹多功能流式點陣儀及其技術并將其譽為"真正的臨床應用型生物芯片"。 乳膠微球的工作原理是什么？
反應步驟：
1.
用反應緩沖液系數蛋白到 10mg/ml；
2.
用反應緩沖液系數膠乳微球到 1%；
3.
將蛋白溶液加入到膠乳微球溶液中， 10ml 膠乳中加入 1ml 蛋白溶液。 室溫攪拌孵育 2hr；
4.
離心或超濾， 除去未結合蛋白；
5.
將微球蛋白復合物用儲存緩沖液溶解。
注意事項：
1.
比較好蛋白標記量影響因素
1）
有效比表面積： 粒徑減小時， 比表面積/mg 微球值得增加；
2）
膠體穩(wěn)定性： 蛋白對膠乳有穩(wěn)定和去穩(wěn)定作用；
3）
免疫反應： **近標記量由免疫反應需要決定。
2.
膠乳微球中加入蛋白后， 快速攪拌混合， 利于反應均衡。 反應體積是 1ml 時， 可用移液器吸取蛋白加
入微球中， 并吹打數次。 如果反應體積較大時， 用燒杯， 邊攪拌邊加入蛋白， 磁性微球正確安裝方法，你知道嗎？吉林新型微球質量推薦
使用磁性微球時要注意些什么呢？山西原裝進口微球需要多少錢
近年來， 隨著生命科學技術的飛速發(fā)展， 出現(xiàn)
了許多新的檢測技術， 流式熒光微球技術就是其中
的一種。 流式熒光微球技術是以熒光編碼微球作為
傳統(tǒng)免疫學測定的固相載體． 通過流式細胞儀進行
檢測分析。 該技術有機地整合了熒光微球編碼技
術、 激光技術、 應用流體學、 先進的數字信號處理及
計算機技術． 將編碼熒光微球的特異性與流式細胞
儀的高度靈敏性相結合， 可同時測定血液或體液中
的多種可溶性蛋白及核酸． 是一個可同時獲得多重
信息的分析平臺。 該技術也可稱為液態(tài)芯片技術、
懸浮微陣列技術等。 其基本原理是利用許多不同的
微球作為主要基質． 把不同的探針分子固定在微球
上。 然后將這些微球探針懸浮在用來檢測的液相體
系中。 通過兩束激光同時對逐一通過檢測流場的微
球探針上的分類熒光和報告分子上的標記熒光進行檢測
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