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此步驟, 微球的凝集經(jīng)常能觀察到。 因?yàn)榻酉聛淼牟襟E中, EDC 會(huì)將相鄰兩個(gè)微球上的抗體連接起來
從而引起微球凝集或者中和微球表面的羧基或者兩者情況都發(fā)生。 調(diào)節(jié) pH 到 6. 5 或超過 6. 5, 優(yōu)化共價(jià)反應(yīng),
對(duì)微球的分散有幫助。 如果反應(yīng)結(jié)束后微球凝集現(xiàn)象仍然發(fā)生, 用新鮮的 buffer 清洗除去多余的 EDC 和游離
的蛋白, 一般會(huì)使得凝集顆粒再分散。 如果在**終的產(chǎn)品中凝集依然發(fā)生, 嘗試稀釋微球, 一開始可以稀釋
到原來的 50%濃度。 如果稀釋后凝集依然發(fā)生, 可以嘗試在所有 reaction buffer 中加入 Tween20 或 Tergitol
NP9 等非離子型表面活性劑。 這些表面活性劑不會(huì)干擾顆粒的活性或共價(jià)結(jié)合, 但是需要注意的是, 要確保
在這種去污劑存在下微球共價(jià)結(jié)合的抗體的穩(wěn)定。 使用彩色微球時(shí)要注意些什么呢?湖北原裝微球需要多少錢
磁性微球包括磁性高分子微球、 磁性無機(jī) - 無機(jī)
復(fù)合微球、磁性金屬合金微球。 尤其以磁性高分子微球
居多。 磁性微球具有很多優(yōu)良特性, 如具有磁響應(yīng)性,
在外加磁場的作用下可以很方便地分離; 具有電磁吸
波性能, 可有效的避免電磁波的干擾 [1] ;粒徑小, 表面積
大, 表面特性多樣, 易于吸附, 可以通過共聚、 表面改性
賦予其表面多種反應(yīng)性功能基團(tuán) (如 -OH 、 -COOH 、
-CHO 、 -NH 2 、 -SH
等)
, 進(jìn)而可以結(jié)合各種功能物質(zhì),
使物質(zhì)同時(shí)具有多種功能。 因此, 磁性微球在航空、航
海、 通訊等領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用 前景, 特別細(xì)胞分離, 固
定化酶, 靶向 , 免疫測定磁共振成像的造影等生
物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用 河南乳膠微球聯(lián)系方式乳膠微球哪個(gè)牌子的好?
(1)檢測通量大、 樣本用量少。
可對(duì)同一樣本中的多種不同目的分子同時(shí)進(jìn)行分析。 理論
上如果有n種不同的分類熒光, 每種熒光有十個(gè)不同的顏
色梯度的話, 可以對(duì)一個(gè)樣本中的104個(gè)目的分子進(jìn)行檢
測。 由于在同一個(gè)反應(yīng)孔中可以進(jìn)行幾乎所有的檢測, 所
以 的節(jié)省了樣本的用量。 對(duì)于一些比較珍貴的樣本更
為有利. (2)靈活性好, 適用于各種蛋白質(zhì)分析, 也可用于
核酸的分析. 可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)方案自行設(shè)計(jì)分析方
案, 也可使用成套的商品化試劑盒. (3)檢測快速, 在35~
60min內(nèi)可對(duì)96個(gè)不同樣本進(jìn)行檢測.
與傳統(tǒng)的基因芯片和蛋白芯片相比
1) 問題: 蛋白無法吸附到微球上。
解決方法: 加入更多的蛋白; 去除微球中的表面活性劑, 釋放其占據(jù)的蛋白結(jié)合位點(diǎn); 引入
中間物, 將微球與蛋白相連; 改變緩沖液。
2) 問題: 標(biāo)記時(shí)加入了大量的蛋白, 但是仍然無活性。
解決方法: 改變蛋白加入量, 從而改變蛋白與微球結(jié)合的空間構(gòu)象; 使用表位稀釋物, 占據(jù)
微球上的部分蛋白結(jié)合位點(diǎn), 防止蛋白靠的太近。
3) 問題: 清洗去除未吸附蛋白后, 微球聚集。
解決方法: 增加蛋白標(biāo)記量或封閉劑的用量, 防止有空余位點(diǎn);
4) 問題: 標(biāo)記后開始活性很好, 儲(chǔ)存一段時(shí)間后, 活性降低。
解決方法: 降低儲(chǔ)存溫度到 2~8 度; 降低儲(chǔ)存液中的封閉劑濃度, 防止抗體被替換; 確認(rèn)
儲(chǔ)存液中無能與抗體競爭的雜質(zhì), 防止長時(shí)間取代抗體。 乳膠微球的操作步驟。
近年來, 隨著生命科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展, 出現(xiàn)
了許多新的檢測技術(shù), 流式熒光微球技術(shù)就是其中
的一種。 流式熒光微球技術(shù)是以熒光編碼微球作為
傳統(tǒng)免疫學(xué)測定的固相載體. 通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行
檢測分析。 該技術(shù)有機(jī)地整合了熒光微球編碼技
術(shù)、 激光技術(shù)、 應(yīng)用流體學(xué)、 先進(jìn)的數(shù)字信號(hào)處理及
計(jì)算機(jī)技術(shù). 將編碼熒光微球的特異性與流式細(xì)胞
儀的高度靈敏性相結(jié)合, 可同時(shí)測定血液或體液中
的多種可溶性蛋白及核酸. 是一個(gè)可同時(shí)獲得多重
信息的分析平臺(tái)。 該技術(shù)也可稱為液態(tài)芯片技術(shù)、
懸浮微陣列技術(shù)等。 其基本原理是利用許多不同的
微球作為主要基質(zhì). 把不同的探針分子固定在微球
上。 然后將這些微球探針懸浮在用來檢測的液相體
系中。 通過兩束激光同時(shí)對(duì)逐一通過檢測流場的微
球探針上的分類熒光和報(bào)告分子上的標(biāo)記熒光進(jìn)行檢測
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有人知道熒光微球嗎?湖北原裝微球需要多少錢
(b) 少數(shù)研究人員選擇用含少量蛋白的緩沖液沖洗微球(可以降低體系中的離子強(qiáng)度)
(c) 適當(dāng)降低緩沖液的濃度, 但不能使蛋白變性。
(d) 稀釋微球, 使微球間距離加大, 減少相互結(jié)合的機(jī)會(huì)
(e) 如果有可能, 加大偶聯(lián)蛋白的濃度
(f) 偶聯(lián)時(shí), 將微球加入蛋白液中, 而不是將蛋白加入微球中
(g) 偶聯(lián)時(shí), 振蕩加快反應(yīng)
總之, 其原則是在微球與蛋白偶聯(lián)前, 減少其在高離子強(qiáng)度下與其它微球接觸的機(jī)會(huì)。 在偶
聯(lián)結(jié)束后, 由于微球表面接有的蛋白, 會(huì)非常穩(wěn)定。 湖北原裝微球需要多少錢
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