由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同,對不同波長光線的吸收能力也不同,因此,每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長的混合光中,將每一種單色光分離出來,并測量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計(jì)。分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見光區(qū),分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光,其光譜帶寬比較大不超過3-5nm,在紫外區(qū)可到1nm以下,來自棱鏡或光柵,具有較高的精度。分光光度計(jì)?就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器??梢娀鹧婀舛扔?jì)一般使用玻璃比色皿即可,而紫外可見火焰光度計(jì)的紫外區(qū)段需使用石英比色皿。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途
分光光度計(jì)分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室檢測核酸或者蛋白樣品濃度**常用的工具之一。儀器使用頻繁,但甚少見到有人維護(hù)。其實(shí),保持分光光度計(jì)清潔、無污染是成功操作的關(guān)鍵。清潔儀器我們應(yīng)該用蘸有中性清潔劑的軟布擦拭分光光度計(jì)的表面。刺激性的清潔劑可能會損壞儀器表面。你也可以清潔比色皿本身。比色皿插槽只能用蘸有乙醇或異丙醇的無絨棉簽來清潔。這可防止液體進(jìn)入內(nèi)部。如果你必須要用水清潔,那么可用蘸有乙醇或異丙醇的棉簽來加速干燥。比色皿插槽的蓋子也可以清潔,但不是泡在清潔劑中。如有必要,拆下蓋子,用蘸有溫和清潔劑的軟布或無絨棉簽來清潔。此外,平時不使用時,應(yīng)蓋上比色皿插槽的蓋子,以免灰塵或其他污染物落入。消毒和凈化如果分光光度計(jì)被微生物所污染,那么可采用下列步驟進(jìn)行消毒和凈化。首先,利用溫和的清潔劑來清潔設(shè)備。然后,用蘸有消毒劑(通常是酒精溶液)的軟布擦拭表面。如有必要,拆下并清潔比色皿插槽。檢查組件維護(hù)的另一方面在于檢查分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確性。Eppendorf提供了一個濾光片系統(tǒng)(BioSpectrometerreferencefilterkit),以評估光度準(zhǔn)確性和系統(tǒng)的波長誤差。試劑盒包含一個空白濾光片、三個檢查光度的濾光片和三個校正波長的濾光片。上海生物火焰光度計(jì)廠家保持紫外-可見火焰光度計(jì)表面和工作環(huán)境的清潔。
光度計(jì)在使用過程中,由于機(jī)械振動、溫度變化、燈絲變形、燈座松動或更換燈泡等原因,經(jīng)常會出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過溶液的波長不符合的現(xiàn)象,因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,影響測定結(jié)果的精度,需要進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)波長準(zhǔn)確度較簡單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值,如果,測出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定,則需要進(jìn)行波長調(diào)節(jié)。用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10%、20%、30%左右的光譜中性濾光片,可見光區(qū)分別在440、546、635nm波長處,以空氣為參比,分別測量各濾光片的透射比,紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長處,以高氯酸溶液為參比,測量其透射比。
由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實(shí)際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時波長準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。2、透射比(吸光度)準(zhǔn)確度很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。3、雜散光雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。使用與維護(hù)1、若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測量。2、指針式儀器在未接通電源時,電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。3、比色皿使用完畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈。溫、濕度較高的地區(qū)應(yīng)特別注意勿使紫外可見火焰光度計(jì)受潮。
雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測量。指針式儀器在未接通電源時,電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。不用紫外-可見火焰光度計(jì)時,請及時關(guān)機(jī)、并拔掉電源插頭,以防止雷雨天氣可能造成的損壞。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途
紫外可見火焰光度計(jì)常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途
在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途