羅丹明B的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光光譜如圖4所示。短波長(zhǎng)側(cè)的熒光被再次吸收,導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度變高的同時(shí)峰頂向長(zhǎng)波長(zhǎng)側(cè)變化。根據(jù)577nm的熒光強(qiáng)度值創(chuàng)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖5以及圖6所示。如圖5所示,在ug/ml(Abs)或更高的高濃度區(qū)域,標(biāo)準(zhǔn)曲線是彎曲的,但在圖6的低濃度區(qū)域,可獲得線性度良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。3比較結(jié)果、定量下限值來(lái)比較靈敏度與應(yīng)用報(bào)告,使用標(biāo)準(zhǔn)曲線和10次空白測(cè)定中計(jì)算得的標(biāo)準(zhǔn)偏差σ,計(jì)算出了定量下限值(10σ)和檢測(cè)下限值(3σ)。另外,采用了線性度較高的標(biāo)準(zhǔn)曲線。UV-2600i和RF-6000的定量下限值和檢測(cè)下限值如表3所示。從通過(guò)本實(shí)驗(yàn)算出的定量下限值的比可知,RF-6000的靈敏度較高,是UV-2600i的400倍以上。即使對(duì)圖3和圖6的低濃度區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,圖6(RF-6000)的結(jié)果中得到了離散較小的標(biāo)準(zhǔn)曲線。與對(duì)未被樣品吸收的照射光進(jìn)行檢測(cè)的吸光光度法不同,熒光光度法以零為標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)熒光,因此噪聲水平低,可得到較高的靈敏度。UV-2600i和RF-6000的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)的平方值與濃度范圍的關(guān)系如表4所示。另外,使用UV-2600i時(shí),低于空白以外的定量下限值的點(diǎn)除外。即使在未達(dá)到UV-2600i的定量下限值的區(qū)域(0~)。上海光度計(jì)的型號(hào)種類。廣東光譜儀光度計(jì)操作
試劑盒包含一個(gè)空白濾光片、三個(gè)檢查光度的濾光片和三個(gè)校正波長(zhǎng)的濾光片。每個(gè)濾光片的吸光值是相對(duì)空白濾光片測(cè)定的。這個(gè)試劑盒不僅能讓用戶獲得測(cè)量準(zhǔn)確性的信息,也能提供精確度的信息,包括平均值和變異系數(shù)。在測(cè)量準(zhǔn)確性和精確度時(shí),將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測(cè)得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長(zhǎng)時(shí),測(cè)定三個(gè)測(cè)試濾光片在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個(gè)波長(zhǎng)的變異系數(shù)。**后,許多分光光度計(jì),包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個(gè)特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶至少每周運(yùn)行一次自檢,但自動(dòng)自檢的頻率可根據(jù)需要進(jìn)行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個(gè)部分。它通過(guò)測(cè)定現(xiàn)有波長(zhǎng)的隨機(jī)誤差來(lái)校驗(yàn)檢測(cè)器,通過(guò)檢查**大能量、隨機(jī)誤差、基準(zhǔn)傳感器的信號(hào)和光強(qiáng)度來(lái)校驗(yàn)光源。**后,它還通過(guò)測(cè)定紫外光譜范圍內(nèi)強(qiáng)度峰值位置的精確度來(lái)確定波長(zhǎng)的系統(tǒng)及隨機(jī)誤差。遵照這些建議來(lái)維護(hù)分光光度計(jì),那么在今后的使用過(guò)程中再也不用擔(dān)心測(cè)量結(jié)果有問題啦。(來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)整理)(圖片來(lái)源:Pixabay)上周看點(diǎn)2832萬(wàn)大單!山一大公開采購(gòu)成像分析系統(tǒng)等設(shè)備刷瓶子!實(shí)驗(yàn)室新人的共同回憶……趣味科普丨?。V東國(guó)產(chǎn)光度計(jì)推薦上海元析告訴您光度計(jì)的選擇方法。
在儀器改變測(cè)試波長(zhǎng)和測(cè)試一段時(shí)間后可通過(guò)按0%鍵和100%/0A鍵對(duì)儀器進(jìn)行調(diào)零和調(diào)滿度、吸光度。(5)顯示方式的選擇【相關(guān)實(shí)驗(yàn)】鄰二氮菲吸光光度法測(cè)定鐵的含量報(bào)告實(shí)驗(yàn)?zāi)康泥彾莆夤舛确y(cè)定鐵的含量;熟悉722N型分光光度計(jì)的原理和操作。實(shí)驗(yàn)原理鄰二氮菲吸光光度法是測(cè)定鐵含量的常用方法。在PH為2~9的溶液中,F(xiàn)e2+的顯色劑鄰二氮菲形成穩(wěn)定的橘紅色絡(luò)合物,該絡(luò)合物在508nm波長(zhǎng)處有**大吸收。為了消除Fe2+的副反應(yīng)及其他因素的影響,在微酸溶液進(jìn)行,且用鹽酸羥胺將Fe3+還原為Fe2+。吸光光度法定量分析的依據(jù)是朗伯比爾定律A=?bc,當(dāng)液層厚度b一定時(shí)A=Kc,吸光光度法定量分析的方法有直接比較法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法,這個(gè)實(shí)驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出試液中鐵的含量,按下式求出原始待測(cè)溶液中鐵的含量(ρ表示溶液中鐵的含量,mg/L)ρFe,原始待測(cè)溶液=ρFe,標(biāo)準(zhǔn)曲線查得×50/10實(shí)驗(yàn)步驟1、取出容量瓶和移液管,用蒸餾水清洗容量瓶并用相應(yīng)的溶液潤(rùn)洗移液管;2、在6個(gè)容量瓶中用刻度移液管分別加入,、、、、、,5mLHAc-NaAc緩沖溶液,1mL10%鹽酸羥胺溶液及,用水定容。將其分別對(duì)應(yīng)編號(hào)為1、2、3、4、5、6號(hào)。
分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對(duì)應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個(gè)吸收峰的波長(zhǎng)。由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實(shí)際波長(zhǎng)與儀器的波長(zhǎng)讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度,對(duì)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度要求允許寬些。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時(shí)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測(cè)試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。選擇光度計(jì)的有哪些方法?
分光光度計(jì)是用不連續(xù)的波長(zhǎng)采樣反射物體或透射物體的一種測(cè)量?jī)x器。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同,對(duì)不同波長(zhǎng)光線的吸收能力也不同,因此,每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長(zhǎng)的混合光中,將每一種單色光分離出來(lái),并測(cè)量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計(jì)。分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見光區(qū),分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光,其光譜帶寬比較大不超過(guò)3-5nm,在紫外區(qū)可到1nm以下,來(lái)自棱鏡或光柵,具有較高的精度。歡迎致電上海元析咨詢光度計(jì)。福建分光光度計(jì)使用
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并交替通過(guò)入射狹縫進(jìn)入單色器中,經(jīng)離軸拋物鏡將光束平行地投射在光柵上,色散并通過(guò)出射狹縫之后,被濾光片濾除高級(jí)次光譜,再經(jīng)橢球鏡聚焦在探測(cè)器的接收面上。探測(cè)器將上述交變的信號(hào)轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號(hào),經(jīng)放大器進(jìn)行電壓放大后,轉(zhuǎn)入A/D轉(zhuǎn)換單位,計(jì)算機(jī)處理后得到從高波數(shù)到低波數(shù)的紅外吸收光譜圖。JC-HW30A雙光束紅外分光光度計(jì)二、紫外可見分光光度計(jì)和紅外分光光度計(jì)的概述不同:1、紫外分光光度計(jì)的概述:根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收,特別是比較大吸收波長(zhǎng)λmax和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很***的應(yīng)用。在國(guó)內(nèi)外的藥典中,已將眾多的藥物紫外吸收光譜的比較大吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)載入其中,為藥物分析提供了很好的手段。2、紅外分光光度計(jì)的概述:由光源發(fā)出的光,被分為能量均等對(duì)稱的兩束,一束為樣品光通過(guò)樣品,另一束為參考光作為基準(zhǔn)。這兩束光通過(guò)樣品室進(jìn)入光度計(jì)后,被扇形鏡以一定的頻率所調(diào)制,形成交變信號(hào)。三、紫外可見分光光度計(jì)和紅外分光光度計(jì)的應(yīng)用不同:1、紫外分光光度計(jì)的應(yīng)用:將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測(cè)定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)。廣東光譜儀光度計(jì)操作