外泌體rna測序

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體，從而提高了分離效率。此外，使用磁珠時，樣品起始體積沒有上限，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質(zhì)時容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進行比較時，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高、速度更快，并且不需要昂貴的儀器。另外，與其他分離方法（如超速離心或超濾）相比，磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成。外泌體rna測序

常規(guī)生物學(xué)實驗中，實時定量PCR技術(shù)（RT-PCR）普遍用于microRNA的檢測實踐中，但外泌體樣品中的microRNA豐度極低，普通RT-PCR技術(shù)的靈敏度已經(jīng)不能夠滿足。第三代微滴式數(shù)字PCR——ddPCR技術(shù)，成為外泌體microRNA檢測的選擇技術(shù)。微滴式數(shù)字PCR（DropletdigitalPCR），又成為“油包水PCR”，在傳統(tǒng)的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后，逐個對每個微滴進行檢測，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。血液外泌體PKH26外泌體為細(xì)胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領(lǐng)域。

外泌體的基本信息：1、外泌體的大?。和饷隗w的直徑約40-150nm。2、從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。3、外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌體的直接比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。5、外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個，近乎于平均每個細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個。6、外泌體的細(xì)胞源：人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體。7、外泌體具有異質(zhì)性，即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。8、外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙、體液中。9、外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體。

根據(jù)內(nèi)侵量的不同，可以產(chǎn)生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細(xì)胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過細(xì)胞骨架和微管網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)運至質(zhì)膜，借助mvb-?？康鞍淄？吭谫|(zhì)膜的腔側(cè)。隨后胞吐導(dǎo)致具有與質(zhì)膜相似的脂質(zhì)雙分子層方向的外泌體的釋放。有幾種蛋白參與了外泌體的生物發(fā)生，包括RabGTPases、ESCRT蛋白，以及其他也被用作外泌體標(biāo)記的蛋白(CD9、CD81、CD63、flotillin、TSG101、神經(jīng)酰胺和Alix)。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì)。

外泌體與免疫反應(yīng)、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病和病癥進展相關(guān)。由外泌體傳遞到受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應(yīng)。這種外泌體介導(dǎo)的反應(yīng)可以促進或阻止疾病。外泌體在調(diào)節(jié)復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途，包括神經(jīng)退行性疾病和病癥。外泌體可被設(shè)計用于遞送不同的診療有效載荷，包括短干擾、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫調(diào)節(jié)劑，并具有將其遞送到預(yù)期目標(biāo)的能力。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞，調(diào)控細(xì)胞生理活動。山東腦脊液外泌體

基于外泌體的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價值。外泌體rna測序

當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進了肉瘤的生長與侵襲。外泌體rna測序

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