組織外泌體iTRAQ

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-10

細(xì)胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對(duì)靶細(xì)胞的影響可能是通過(guò)不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來(lái)控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中。近年來(lái),隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域。外泌體的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙、體液中。組織外泌體iTRAQ

組織外泌體iTRAQ,外泌體提取試劑盒

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用,并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng)。外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸,如miRNA和環(huán)狀RNA。外泌體可以通過(guò)多種方法給藥,靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。納米流式 外泌體外泌體的提取的方式:PS親和法。

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細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來(lái)完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細(xì)胞分泌,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì)。來(lái)源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來(lái),隨著外泌體研究的不斷深入,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。

細(xì)胞外小泡通過(guò)充當(dāng)脂肪組織、肝臟、骨骼肌和免疫細(xì)胞之間的細(xì)胞間通訊方式,在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用,外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機(jī)理的主要組成部分。外泌體似乎通過(guò)至少兩種不同的機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)胰島素敏感性,即通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥或通過(guò)與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用。后者可通過(guò)與主要胰島素信號(hào)分子(例如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信號(hào)通路)相互作用而影響胰島素信號(hào)通路而直接或間接發(fā)生。與對(duì)照組相比,糖尿病患者的血漿EV含量更高,并且與對(duì)照組相比,糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高。然而,確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對(duì)它們的組成有更好的了解,特別是飲食是否會(huì)改變腸源性外泌體的含量,因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學(xué)功能尚未研究。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合。

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外泌體發(fā)現(xiàn)于1986年,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體,可由機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞如免疫細(xì)胞、干細(xì)胞、心血管細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、血小板、神經(jīng)細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等主動(dòng)分泌產(chǎn)生,普遍分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等體液中。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過(guò)程,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),另一方面也可以作為診療手段,未來(lái)有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法。江西鼻腔灌洗液外泌體

外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)。組織外泌體iTRAQ

外泌體分離的主要挑戰(zhàn)之一是消除納米級(jí)污染物,包括干擾外泌體標(biāo)志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。盡管如此,它仍難以符合臨床應(yīng)用所需的標(biāo)準(zhǔn),主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,產(chǎn)量較低,完整性欠佳且分離純化操作耗時(shí)長(zhǎng)。其他方法,例如基于聚乙二醇(PEG)的沉淀,磷脂酰絲氨酸親和捕獲,尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,近年來(lái)已經(jīng)出現(xiàn)在特定的應(yīng)用中,但是只適用于特定場(chǎng)景。近來(lái),非對(duì)稱流場(chǎng)-流分離方法已被用于從細(xì)胞和瘤子培養(yǎng)基中高分辨率地分選EV亞群,但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響。單一分析耗時(shí)的過(guò)程也限制了其普遍的應(yīng)用。因此,目前亟需開發(fā)創(chuàng)新技術(shù)以提高外泌體分離純化的效率,純度,產(chǎn)量,速度和耐用性?;诔瑸V的技術(shù)提供了潛在的有前途的替代方法,但它們也有缺點(diǎn)。在切向流過(guò)濾中,使進(jìn)料流平行于多孔膜流動(dòng),以避免堵塞。然而,盡管已實(shí)現(xiàn)使用切向流過(guò)濾從大量條件細(xì)胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體,但受制于其一次性模塊的成本高,高剪切應(yīng)力,難以處理小體積樣品等因素而難以應(yīng)用于臨床分析。組織外泌體iTRAQ

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