液體活檢

外泌體的生物發(fā)生和鑒定。液體和細(xì)胞外成分，如蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、代謝物、小分子和離子，可以通過(guò)內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷，與細(xì)胞表面蛋白一起進(jìn)入細(xì)胞。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向。這一出芽過(guò)程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線(xiàn)粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合。ESEs也可以與ER和TGN融合，這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達(dá)它們的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類(lèi)型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運(yùn)至其他PD-L1表達(dá)低或沒(méi)有PD-L1的細(xì)胞，并可能與PD-1結(jié)合。液體活檢

近年來(lái)，外泌體的捕獲技術(shù)越來(lái)越多，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè)。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度。另外，樣品量的注入速率比較低，因此，對(duì)于大樣品量，將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前，研究人員已開(kāi)發(fā)了多種方法來(lái)分離外泌體，離心技術(shù)仍然是常用方法，其他方法，例如過(guò)濾、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但目前仍然沒(méi)有一種公認(rèn)有效的提取方法，研究人員應(yīng)針對(duì)不同來(lái)源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。血漿外泌體lncRNA芯片外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評(píng)估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見(jiàn)的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類(lèi)別，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射，捕獲并檢測(cè)散射的電子，從而生成粒子圖像。但是，在TEM中，不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品，并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè)。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜，不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量；而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程，對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞，從而影響觀察的效果，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度。

為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀？答：這種問(wèn)題通常有三種可能性，其一：使用的細(xì)胞上清或者血清量太低，從而造成了這樣的結(jié)果。其二：使用了不透明的超速離心管，一般來(lái)說(shuō)外泌體產(chǎn)量都比較小，所以凡是不透明的管子，基本都是比較難見(jiàn)到明顯沉淀的，可以當(dāng)做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角轉(zhuǎn)。部分品牌離心機(jī)的角轉(zhuǎn)管壁粘附性比較低，超離結(jié)束沒(méi)多久沉淀就會(huì)滑落下去，所以請(qǐng)?jiān)陔x心結(jié)束時(shí)趕緊去收樣。外泌體的角色：1、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細(xì)胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。2、外泌體的角色之一：細(xì)胞-細(xì)胞通訊，比如抗原遞呈。外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。

外泌體生物學(xué)功能：1、在心血管系統(tǒng)中，據(jù)報(bào)道，源自人胚胎干細(xì)胞（ESC）的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷；2、在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過(guò)外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類(lèi)免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制；3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中，外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動(dòng)，從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理；迄今為止，尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細(xì)胞結(jié)合的途徑。然而，比較明顯，其結(jié)合過(guò)程從外泌體識(shí)別受體細(xì)胞PM上的特定受體開(kāi)始。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ)，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍，外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細(xì)胞中。流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升。胸水外泌體miRNA測(cè)序

在凝血過(guò)程中血小板會(huì)分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來(lái)自額外的分泌。液體活檢

肉瘤細(xì)胞可以通過(guò)產(chǎn)生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應(yīng)答并促進(jìn)瘤子細(xì)胞的活動(dòng)而大量產(chǎn)生外泌體，這些外泌體富含促病的細(xì)胞成分，例如PD-L1、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白，參與病癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和耐藥性。值得注意的是，肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1。ESCRT（運(yùn)輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合體）參與將生物分子包裝到外泌體中，nSMase2（中性鞘磷脂酶2）和Rab蛋白調(diào)節(jié)外泌體分泌。已確定ESCRT、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運(yùn)至其他PD-L1表達(dá)低或沒(méi)有PD-L1的細(xì)胞，并可能與PD-1結(jié)合。液體活檢

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