潤微外泌體

Exosome，中文名外泌體，是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。2015年，隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出，越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個新型的研究熱點，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性，已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式，在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式：超速離心法。細胞外囊泡（EVs）表示了細胞間通訊的一個重要模式。潤微外泌體

Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進一步純化胎盤相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經(jīng)過多次實驗反復(fù)驗證，確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。唾液外泌體鑒定通過壓制或去除這些外泌體，有希望壓制疾病發(fā)生。

外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖,基于抗原–抗體特異性識別和結(jié)合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì),其結(jié)果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標志物的表達,也可以瞬時讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。

Exosome（外泌體）是由活細胞分泌小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細胞之間的交流，物質(zhì)的運輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。對分離的外泌體進行體外標記或示蹤，有助于對外泌體的功能進行進一步的研究。目前對于外泌體的標記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細胞跟蹤研究。外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標的診斷窗口。

外泌體在各種疾病的診斷和治理中的應(yīng)用研究火熱。外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標的診斷窗口。此外，能夠向病變細胞輸送功能性物質(zhì)的特性使外泌體有潛力作為基因和藥物遞送的載體。有研究總結(jié)了從外泌體中篩選的生物標志物，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理。外泌體在生物液體中寬泛分布，包括血液、尿液、唾液、胸腹水、腦脊液、膽汁、乳汁以及淚液等，其復(fù)雜的內(nèi)容物被認為是疾病診斷的無創(chuàng)或微創(chuàng)生物標志物，具有檢測包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力，可以用于對心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細胞內(nèi)信號或融合。血漿外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

外泌體的膜同細胞一樣，是磷脂雙分子層。潤微外泌體

尺寸排除色譜法是使用聚合物凝膠或類似的固定相柱進行外泌體分離的技術(shù),樣品以重力滴落的方式收集。流體力學(xué)半徑較小的樣品組分進入凝膠孔隙后,需耗費相對較長的時間通過凝膠柱,導(dǎo)致延遲洗脫,實現(xiàn)不同粒徑大小顆粒分離。尺寸排除色譜法可以與差速離心法結(jié)合而不會明顯損失外泌體,保證產(chǎn)量的同時可有效去除雜質(zhì)蛋白,更適合目標蛋白質(zhì)組學(xué)和miRNA的分析。靜水過濾透析法主要利用靜水壓力迫使樣品中不同特定大小分子先后通過透析管,其中溶劑和小溶質(zhì)很容易通過透析管,而較大的顆粒,如外泌體和其他囊泡,仍留在透析管中而被收集。潤微外泌體

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