廣州外泌體染色

作用機制主要是旁分泌的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）被普遍地用于醫(yī)治各種人類疾病。已經(jīng)證明沒有一個因素足以調(diào)解MSC的醫(yī)治效果。然而，由許多細(xì)胞（包括MSC）分泌的外泌體膜囊泡是有吸引力的候選物作為其功效的載體。外泌體可以運輸和運送大量的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸，并可以改變細(xì)胞和身體部位的功能。除了作為細(xì)胞間通訊的關(guān)鍵作用之外，外泌體越來越多地被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子。此外，它們有潛力被用作臨床應(yīng)用基因和藥物遞送的載體。該文回顧了外泌體的生物發(fā)生、分子組成及其作為細(xì)胞間通訊的信使的作用，著重于其作為干細(xì)胞醫(yī)治的載體的潛力。外泌體作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。廣州外泌體染色

在免疫系統(tǒng)中，淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等均可以產(chǎn)生外泌體。研究表明免疫細(xì)胞來源的外泌體能夠明顯影響機體的免疫調(diào)節(jié)機制，包括調(diào)節(jié)抗原呈遞、免疫激huo、免疫監(jiān)督等。不同免疫細(xì)胞來源的外泌體功能不同，以樹突狀細(xì)胞(該細(xì)胞具有免疫刺激能力，是目前能夠激huo初始T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞)來源的外泌體為例，其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細(xì)胞的成熟狀態(tài)。成熟的樹突狀細(xì)胞外泌體內(nèi)包含能夠直接激huoT細(xì)胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ，共刺激分子如CD40、CD8、CD86和熱激蛋白，這些分子使樹突狀細(xì)胞來源的外泌體具有抗原呈遞、調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的生物功能。細(xì)胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家外泌體在免疫調(diào)控、肉瘤轉(zhuǎn)移和血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域發(fā)揮著非常重要的作用。

一方面，外泌體可以通過調(diào)控細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化如細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，促進(jìn)HCC的發(fā)生和發(fā)展。另一方面，惡性瘤細(xì)胞分泌的外泌體可以協(xié)同其他瘤細(xì)胞一起，調(diào)控瘤微環(huán)境，以利于HCC發(fā)展。人HCC細(xì)胞外泌體中含有的一系列miRNAs，會減弱其他HCC細(xì)胞中TGF-β通路上的蛋白表達(dá)，促進(jìn)HCC細(xì)胞的生長。HCC細(xì)胞外泌體還會誘導(dǎo)非致瘤性肝細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞遷移和侵襲，具有運動能力的HCC通過釋放外泌體誘導(dǎo)肝細(xì)胞分泌MMP-2和MMP-9，增強HCC細(xì)胞的侵襲能力。經(jīng)HCC中分離到的CD90+外泌體處理的內(nèi)皮細(xì)胞會表達(dá)更多的VEGF和VEGFR1，促進(jìn)血管生成；同時誘導(dǎo)ICAM-1表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移。還有研究表明外泌體參與HCC缺氧脅迫和藥物耐受的調(diào)控。

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射，捕獲并檢測散射的電子，從而生成粒子圖像。但是，在TEM中，不與粒子相互作用的電子穿過樣品，并使用熒光屏進(jìn)行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜，不適合進(jìn)行大量快速的測量；而且由于樣本經(jīng)過了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程，對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞，從而影響觀察的效果，無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度。確認(rèn)外泌體生理作用的單獨方法就是明確外泌體的釋放機制，通過促進(jìn)或壓制釋放機制。

外泌體含有的信號分子能反映分泌細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),甚至還會包含細(xì)胞病態(tài)相關(guān)的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標(biāo)志物分子源。瘤細(xì)胞分泌的外泌體通過對大分子物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和傳遞調(diào)節(jié)臨近或遠(yuǎn)處瘤生長的微環(huán)境,對促瘤生成及瘤增生、轉(zhuǎn)移發(fā)揮著不同的調(diào)節(jié)作用。瘤細(xì)胞分泌的外泌體還可以通過誘導(dǎo)耐藥和免疫抑制來促進(jìn)瘤的發(fā)展。外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長時間,這些特點使得外泌體可應(yīng)用于瘤的早期診斷和預(yù)后判斷。靶向瘤的外泌體的標(biāo)志物可能為瘤疾病的診斷和治理提供新的指標(biāo)和途徑,對高危人群早期診斷和早期治理以降低或減緩瘤病例的發(fā)生上發(fā)揮著重要的作用。神經(jīng)細(xì)胞來源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子。湖南外泌體lncRNA測序

外泌體的提取的方式：過濾離心。廣州外泌體染色

被特定部位的細(xì)胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達(dá)譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān)，而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取，進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá)。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測肉瘤轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。廣州外泌體染色

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