外泌體原位檢測

外泌體(exosomes)是一類由細胞分泌到胞外的囊泡。與其他兩種胞外囊泡(微囊泡和凋亡小體)相比，外泌體在產生方式、尺寸、密度和內容物等方面存在明顯差異。不同于微囊泡“出芽”的形成方式，外泌體主要通過胞吐過程釋放至細胞外:首先細胞膜向內凹陷形成早期核內體(earlyendosomes)，早期核內體進一步內陷形成多泡體(multivesicularbodies，MVBs)，其中一部分多泡體與溶酶體(lysosome)融合，進而降解;另一部分與細胞膜融合，將其內部所包含的囊泡釋放至胞外，即為外泌體。外泌體具有獨特的物理化學性質，其直徑為30～200nm，密度為1.13～1.19g/mL，組成包括細胞來源相關的脂質、蛋白質、RNA、DNA等物質，在其表面連接有大量的糖鏈，如甘露糖、聚乳糖胺和α2，6-唾液酸等。外泌體可以作為生物標志物來對疾病進行檢測。外泌體原位檢測

外泌體是新型治理劑，惡性瘤細胞往往能夠通過分泌大量外泌體抑制宿主固有免疫。對外泌體的質譜研究發(fā)現，惡性瘤細胞的外泌體含有大量活化型的表皮生長因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR），可以抑制宿主細胞α型干擾素(IFN-α)的產生。這就解釋了為什么部分瘤患者固有免疫低下，也為晚期病癥患者的治理提供一個新的策略和理論依據。除了瘤，外泌體在其他疾病如心血管疾病等的診斷和治理的相關臨床試驗也在世界范圍內開展中。外泌體原位檢測在從體液中提取外泌體后，體液可長期穩(wěn)定保存。

雖然外泌體作為藥物載體具有生物兼容性、穩(wěn)定性和內在靶向性等潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：選擇何種細胞作為外泌體的供體：如DCs來源的外泌體可用于免疫治理，因其富含組織相容復合物（MHC）及T細胞共刺激分子，能在體內喚醒T淋巴細胞，進而抑制瘤細胞增殖；骨髓來源的間充質干細胞（MSCs）來源的外泌體對KRAS基因有抑制作用；γδT細胞、自然殺傷細胞（NK）、瘤細胞等均有研究報道可作為載藥級別外泌體的細胞來源。

利用蛋白質免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經典表征手段之一，操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質包括四跨膜蛋白質CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等，內參蛋白質可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標志蛋白)或鈣聯(lián)結蛋白Calnexin。在酶聯(lián)免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題，相比較而言，酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。

在多細胞生物體內，遠處的細胞可以通過傳遞單個分子或細胞外囊泡（EVs，包括exosomes和microvesicles等）交換信息。該綜述介紹了一些EVs引人注目的功能，以及我們目前對其生理作用認識的局限。盡管有初步研究表明，EVs在體內具有一些生理功能，但EVs的本質特性仍有待進一步澄清。這篇綜述主要關注種瘤細胞和微環(huán)境，但類似的結果和挑戰(zhàn)也適用于EVs介導的其他的病理/生理過程。功能神經的能力和完整性需要感覺運動神經元、神經元和神經膠質細胞之間的交互式信息交流。外泌體研究相對困難，需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。干細胞外泌體粒徑檢測

外泌體是細胞在特定條件下分泌的小囊泡，是細胞間傳遞信號，相互溝通和影響的重要工具。外泌體原位檢測

外泌體富含蛋白質、脂質和核酸分子，這些分子具有來源細胞的特異性，所以通過分析中流細胞所釋放的外泌體分子特征就可部分反映其來源細胞表型及其生物學作用?，F已發(fā)現多種中流外泌體來源的蛋白類分子標志物。例如，乳腺ai、結腸ai和胰腺ai中均可檢測到磷脂酰肌醇蛋白聚糖1（glypican1，GPC1）的表達，且與乳腺ai和結腸ai相比，GPC1對胰腺ai的早期診斷尤具價值。前列腺ai患者血漿外泌體中凋亡抑制蛋白的表達增高則提示與中流進展相關。隨著蛋白組學技術的發(fā)展，研究發(fā)現中流患者血液外泌體來源的蛋白標志物其診斷特異性和敏感性分別可達到95％和90％。外泌體原位檢測

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