血漿外泌體提取方法

事實(shí)上，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明：在小鼠急性心肌梗塞術(shù)后，注射來(lái)源于間充質(zhì)干細(xì)胞、心臟祖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或心肌源性細(xì)胞的外泌體均可改善心臟功能，減輕心臟纖維化，刺激血管生成。例如，心源性細(xì)胞外泌體能通過(guò)特異性的巨噬細(xì)胞極化為急性心肌梗死提供心臟保護(hù)作用。心臟再灌注后，CDCexo的輸注降低了大鼠和豬心肌梗死模型的梗死面積，而且CDCexo會(huì)減少梗死組織內(nèi)CD68+巨噬細(xì)胞數(shù)量，并改變巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)。自體CD34+干細(xì)胞的移植可以改善缺血組織再灌注后的功能，并降低嚴(yán)重肢體缺血患者的截肢率。其作用機(jī)制在于：CD34+干細(xì)胞分泌的外泌體促進(jìn)小鼠下肢缺血模型血管生成。雖然臨床前研究的證據(jù)表明干細(xì)胞釋放的外泌體可以作為心肌修復(fù)的潛在無(wú)細(xì)胞治理劑，但是，目前將外泌體完全用作心臟修復(fù)治理劑之前還是有很多重點(diǎn)問(wèn)題需要解決。外泌體被工程化改造后，具有靶向特定細(xì)胞類(lèi)型或組織的功能。血漿外泌體提取方法

在外泌體中引入藥物的方式包括體內(nèi)裝載和體外裝載兩種。體內(nèi)藥物裝載可以通過(guò)傳統(tǒng)方法(如病毒轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或電穿孔等)轉(zhuǎn)染來(lái)源細(xì)胞，編碼感興趣的RNA或蛋白質(zhì)，也可以使藥物與來(lái)源細(xì)胞共混，使細(xì)胞分泌產(chǎn)生含有目標(biāo)生物分子的外泌體。體外藥物裝載則首先需要得到純化的外泌體，然后將感興趣的藥物通過(guò)電穿孔或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等方法裝入純化的外泌體。外泌體內(nèi)可裝載的藥物包括小分子化學(xué)藥物、蛋白質(zhì)和多肽、核酸藥物、天然產(chǎn)物等。外泌體的冷藏條件有報(bào)導(dǎo)指出，外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過(guò)程。

外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖,基于抗原–抗體特異性識(shí)別和結(jié)合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來(lái)。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹(shù)脂、膜親和過(guò)濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹(shù)狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì),其結(jié)果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá),也可以瞬時(shí)讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價(jià)包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過(guò)磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來(lái)。鑒于微米級(jí)磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。

細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類(lèi)型的膜囊泡。這些細(xì)胞外囊泡（EVs）表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式，作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。然而，我們對(duì)于EV形成的分子機(jī)制知識(shí)的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關(guān)性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機(jī)制。該綜述描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質(zhì)，總結(jié)了其生物學(xué)效應(yīng)，特別是免疫系統(tǒng)，討論了分泌囊泡可能作為細(xì)胞間信使的潛在作用。外泌體是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類(lèi)型的膜囊泡。

除了siRNA和miRNA，mRNA也可以作為“貨物”被外泌體運(yùn)輸。研究表明，在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分離出來(lái)的外泌體含有中流細(xì)胞特異性的mRNA，而被愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒(EBV)感ran的細(xì)胞分泌的外泌體中也含有EBV的潛伏期mRNA。因而，外泌體的這種運(yùn)載mRNA的能力引起了中流研究者們的注意。近期，Saydam等率先報(bào)道了利用多泡體(含外泌體)負(fù)載mRNA/蛋白進(jìn)行中流zhiliao的研究。研究者們利用脂質(zhì)體2000或病毒載體對(duì)HEK-293細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使其分泌的多泡體含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP，其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPＲT:尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶;EGFP:增強(qiáng)型綠色熒光蛋白)。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處，并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC)，神經(jīng)鞘瘤的增長(zhǎng)被明顯抑制。日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。外周血外泌體提取試劑盒價(jià)格

外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域均起著重要的作用，并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。血漿外泌體提取方法

目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法，但這些方法混有非常多的雜質(zhì)，必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定，不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機(jī)、無(wú)法進(jìn)行多樣品分析等問(wèn)題。因此外泌體研究相對(duì)困難，需要盡快開(kāi)發(fā)操作簡(jiǎn)單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此，日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過(guò)磷酯酰絲氨酸（PS）法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠，再經(jīng)過(guò)含有EDTA的洗脫緩沖液進(jìn)行分離，提取高純度的完整外泌體。血漿外泌體提取方法