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外泌體的提取方法：超速離心法，這是外泌體提取比較常用的方法。超速離心法得到的外泌的體量比較多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過濾離心法，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不會(huì)影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期的準(zhǔn)備工作繁雜，比較耗時(shí)，量少。外泌體在化療藥物的促轉(zhuǎn)移過程中具有重要的作用。上海外泌體Dir

外泌體研究可以指導(dǎo)診治肝損傷、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝臟疾病。藥物誘導(dǎo)肝損傷（DILI）大鼠模型中，尿外泌體中的蛋白含量減少，包括CD26、CD81和其他潛在的標(biāo)志物蛋白。而另一項(xiàng)研究則發(fā)現(xiàn)DILI大鼠血清中分離到的外泌體含有更高水平的蛋白，如HSP70、HSP90等。MSCs來源的外泌體可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá)，減弱CCL4誘導(dǎo)的肝損傷。而酒精刺激會(huì)促進(jìn)外泌體的分泌，miRNAs水平也會(huì)升高，并促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌，喚醒單核細(xì)胞的分化。盡管已取得上述成果，我們對(duì)外泌體的研究尚不夠深入，外泌體在肝臟生理和病理中的重要作用及其臨床應(yīng)用仍有待繼續(xù)探索。河南外泌體iTRAQ外泌體在心臟修復(fù)中起著關(guān)鍵作用。

外泌體本身的惰性相當(dāng)高，但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號(hào)傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能，因此，外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣，因?yàn)樗梢岳眠@些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破，要將其用于臨床治理，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先，對(duì)外泌體的具體合成機(jī)制、功能了解并不是非常詳細(xì)。其次，現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟(jì)有效的外泌體分離技術(shù)。

外泌體含有的信號(hào)分子能反映分泌細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),甚至還會(huì)包含細(xì)胞病態(tài)相關(guān)的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標(biāo)志物分子源。瘤細(xì)胞分泌的外泌體通過對(duì)大分子物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和傳遞調(diào)節(jié)臨近或遠(yuǎn)處瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境,對(duì)促瘤生成及瘤增生、轉(zhuǎn)移發(fā)揮著不同的調(diào)節(jié)作用。瘤細(xì)胞分泌的外泌體還可以通過誘導(dǎo)耐藥和免疫抑制來促進(jìn)瘤的發(fā)展。外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長(zhǎng)時(shí)間,這些特點(diǎn)使得外泌體可應(yīng)用于瘤的早期診斷和預(yù)后判斷。靶向瘤的外泌體的標(biāo)志物可能為瘤疾病的診斷和治理提供新的指標(biāo)和途徑,對(duì)高危人群早期診斷和早期治理以降低或減緩瘤病例的發(fā)生上發(fā)揮著重要的作用。不同肝臟疾病中，細(xì)胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。

外泌體基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的探索和深入研究對(duì)如何準(zhǔn)確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術(shù)要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分,并在100000×g~200000×g的轉(zhuǎn)速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術(shù)被認(rèn)為是外泌體分離的“金標(biāo)準(zhǔn)”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結(jié)合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進(jìn)行超濾來提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉(zhuǎn)子類型、旋轉(zhuǎn)半徑、沉降路徑長(zhǎng)度以及樣品黏度等多種因素影響。干細(xì)胞外泌體對(duì)多種類型的免疫細(xì)胞均具有免疫調(diào)節(jié)作用。上海外泌體Dir

外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì)。上海外泌體Dir

為了解決外泌體實(shí)驗(yàn)遇到的上述的各種問題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture?ExosomeIsolationKitPS）提取高純度細(xì)胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細(xì)胞源的蛋白和脂質(zhì)，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細(xì)胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，暴露在外泌體膜外側(cè)3）。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通過巨噬細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細(xì)胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4）?；谏鲜鲋R(shí)，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開發(fā)，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標(biāo)準(zhǔn)超速離心法的新型外泌體純化方法。上海外泌體Dir