產(chǎn)生組織切片非特異性染色的原因有哪些?如何解決?1)、抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是尤其重要的一條。2)、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。3)、內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細胞多的組織),需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;4)、非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強封閉效果;5)、DAB孵育時間過長或濃度過高;6)、PBS沖洗不充分,殘留抗體結(jié)果增強著色,在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要;7)、標(biāo)本染色過程中經(jīng)常出現(xiàn)干片,這容易增強非特異性著色。想進行代謝因子相關(guān)研究嗎?指標(biāo)的選擇很重要,選擇Labex,給你更多的panel,總有你想做的指標(biāo)。Thrombopoietin
多重?zé)晒饷庖呓M化,主要的技術(shù)原理來自TSA技術(shù),TSA即酪酰胺信號放大技術(shù)(Tyramidesignalamplification),是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。該技術(shù)可與高性能染料AlexaFluor、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測系統(tǒng)相兼容。簡單來說,用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP(而不是直接偶聯(lián)熒光素),來催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在HRP和過氧化氫的作用下被活化,跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯(lián),使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。然后微波處理,前一輪非共價結(jié)合的抗體被洗掉,共價結(jié)合的熒光素還留存在樣品上。再換個一抗來第二輪孵育,周而復(fù)始。等到所有抗體孵育結(jié)束,熒光素都結(jié)合好后,然后去檢測結(jié)果。共刺激因子LabEx提供 細胞因子與信號通路蛋白多指標(biāo)檢測。
LUMINEX常見問題及解答(一)1)LUMINEX應(yīng)用于哪些領(lǐng)域?生物醫(yī)學(xué)研究,生物標(biāo)記物開發(fā),臨床檢測等領(lǐng)域。Luminex技術(shù)主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何?靈敏度取決于開頭的質(zhì)量。對于同樣的抗體對,Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術(shù)。一般檢測靈敏度在pg級。3)對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的?血清、血漿是常用的樣本,每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個蛋白。從各種細胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術(shù)檢測,制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達信息?檢測蛋白和基因的數(shù)目主要取決于試劑盒。蛋白質(zhì)檢測目前可以達到50個左右,基因檢測可達500個。5)如何保證檢測結(jié)果的特異性?檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司,產(chǎn)品經(jīng)過了嚴(yán)格的質(zhì)量控制。同時,我們檢測公司也有近15年的經(jīng)驗、嚴(yán)格的操作程序和質(zhì)量控制體系。
LabEx可提供的服務(wù)及優(yōu)勢(一)LabEx服務(wù)的優(yōu)勢:1、專業(yè)的抗體公司;2、先進的實驗儀器平臺;3、可靠、放心的結(jié)果;4、實惠、親民的價格;5、認真、嚴(yán)謹?shù)墓ぷ鲬B(tài)度。ELISA:將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點。流式檢測服務(wù):流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置,它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量。并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把指定的細胞亞群從中分選出來??贵w芯片:具有微型化、集成化、高通量的特點,可以用于檢測某一特定的生理或病理過程相關(guān)蛋白的表達豐度,目前主要用于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白組學(xué)、腫塊物及其他疾病的相關(guān)研究。LabEx 流式平臺:BD C6,BD celesta,BD calibur,12色流式檢測分析。
LabEx多因子檢測技術(shù)應(yīng)用★檢測樣本:血清、血漿、眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細胞培養(yǎng)液上清、細胞裂解物等等各種液相樣本中可溶性細胞因子、炎癥因子、趨化因子、酶等的濃度檢測★腫塊物研究及腫塊物疾病的輔助診斷、療效和預(yù)后監(jiān)測★干細胞研究和干細胞醫(yī)治監(jiān)測★免疫學(xué)研究和免疫疾病的輔助診斷和監(jiān)控★疾病的研究及輔助診斷和療效評價★免疫功能監(jiān)測★藥效評價,藥物研發(fā)、疫苗研究★細胞信號傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白定量分析LabEx服務(wù)為您提供完整的實驗結(jié)果報告,包括數(shù)據(jù)分析結(jié)果,原始數(shù)據(jù)文件,實驗protocol等。電化學(xué)發(fā)光,一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),是電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程的完美結(jié)合。共刺激因子
LabEx提供多音字檢測服務(wù)!Thrombopoietin
酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(Elispot)特點:酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結(jié)合了細胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。實驗設(shè)計在96孔培養(yǎng)板上進行,直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì),包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細胞分泌的細胞因子。(由于涉及到細胞培養(yǎng)的過程,對單克隆抗體的要求要遠高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點。)之后,在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細胞培養(yǎng)基(現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟,培養(yǎng)基中可以不再含有血清)、待檢測的細胞以及抗原刺激物進行培養(yǎng)。Thrombopoietin
上海樂備實生物技術(shù)有限公司擁有從事生物科技、生物制品、醫(yī)藥科技領(lǐng)域的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)服務(wù),檢驗技術(shù)的研發(fā),從事貨物及技術(shù)的進出口業(yè)務(wù),化工產(chǎn)品及原料(除危險化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、易制毒化學(xué)品)、實驗室耗材與設(shè)備的銷售。 【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】等多項業(yè)務(wù),主營業(yè)務(wù)涵蓋標(biāo)志物篩查,多因子檢測,Luminex檢測,MSD技術(shù)服務(wù)。一批專業(yè)的技術(shù)團隊,是實現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ),是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動力。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:標(biāo)志物篩查,多因子檢測,Luminex檢測,MSD技術(shù)服務(wù)等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨,深受客戶好評。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了良好的標(biāo)志物篩查,多因子檢測,Luminex檢測,MSD技術(shù)服務(wù)形象,贏得了社會各界的信任和認可。