炎性因子

來源: 發(fā)布時間:2022-06-23

酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(Elispot)特點:酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結(jié)合了細胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。實驗設(shè)計在96孔培養(yǎng)板上進行,直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì),包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細胞分泌的細胞因子。(由于涉及到細胞培養(yǎng)的過程,對單克隆抗體的要求要遠高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點。)之后,在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細胞培養(yǎng)基(現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟,培養(yǎng)基中可以不再含有血清)、待檢測的細胞以及抗原刺激物進行培養(yǎng)。多因子技術(shù)服務(wù)我們LabEx是專業(yè)!炎性因子

抗體芯片技術(shù)服務(wù)包括:1,樣品蛋白質(zhì)抽提:a.實驗對象為組織樣品,取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑,勻漿后抽提總蛋白。b.實驗對象為細胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細胞,PBS清洗細胞,去PBS加0.1ml-1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑抽提總蛋白。c.實驗對象為血清,則直接進入步驟3。2,蛋白質(zhì)定量:按蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作,測定樣品濃度。3.細胞因子抗體芯片封閉和抗體孵育a.細胞因子抗體芯片封閉后加入50-500ug蛋白質(zhì)(若標本為血清,通常取100ul血清)與抗體芯片4℃孵育過夜。b.加入標記好的抗體室溫孵育1小時。4,抗體芯片檢測5.提供實驗報告:包括詳細的實驗方法和芯片實驗結(jié)果的各種圖表和數(shù)據(jù)比較。您只需提供保存完好的標本(血清、組織或細胞、細胞上清或其他非常規(guī)液質(zhì)生物樣本),本公司專業(yè)的技術(shù)服務(wù)人員就可替您完成實驗操作與數(shù)據(jù)分析。PAI-1LabEx提供 炎癥因子、趨化因子、生長因子等高通量高靈敏檢測。

問:因子檢測技術(shù)有哪些?答:Array抗體芯片、CBA、luminex、MSD。問:多因子實驗適用的樣本類型有哪些?答:Serum(血清)、Plasma(血漿)、Cell/Tissuelysate(細胞/組織裂解液)、CerebrospinalFluid(腦脊液)、支氣管肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液、腹腔液等等。問:如何計算96孔板可做多少樣本?答:標曲16孔,預(yù)實驗8孔,剩余72孔,單孔可做72樣本,復(fù)孔可做36樣本;問:多因子實驗的正式實驗,是否可以分批次檢測?答:可以,但是有如下要注意:(1)CBA:試劑盒須在一個月內(nèi)用完,否則標準曲線要重做,重做就要用到試劑,那樣本就樣減少。(2)Luminex:每次都必須要做標準曲線,會浪費試劑和孔板,同時試劑也要在一個月內(nèi)用完,防止試劑過期。(3)MSD:每次都必須要做標準曲線,會浪費試劑和孔板,同時試劑在一個月內(nèi)用完,防止試劑過期,每次送樣+標準曲線的數(shù)量,建議是4的倍數(shù),否則會造成浪費。

Luminex:應(yīng)用微球和流式細胞儀的原理,微球內(nèi)部含有三種免疫熒光,通過熒光不同的比例可以區(qū)分500種不同的微球。每種微球可以用來檢測一種不同的蛋白或基因。因此,利用微球技術(shù),可以同時檢測高達500個蛋白或基因。Luminex技術(shù)的測量結(jié)果在準確度、精確度、靈敏度方面與ELISA均可達到相似的水平。Luminex應(yīng)用的熒光編碼微球帶有針對不同目標分子的特異性抗體,不同的微球在一定程度上可以自由組合,這樣在一次實驗中可以同時完成多個目標分子的分析。多目標分子的同時測定可以**減少生物樣品的消耗量,節(jié)省成本和測定時間,并且使多種目標分子之間相關(guān)性的分析更加準確。目前,Luminex試劑盒已經(jīng)可以檢測500多種蛋白質(zhì)分子,包括細胞因子、***、自身抗體、**標志物等。細胞因子檢測是一個強大的工具,通過定制識別產(chǎn)生積極反應(yīng)的細胞因子的獨特組合。

免疫組化技術(shù)是用標記物標記的抗體與組織或細胞的抗原(如蛋白質(zhì)、多肽、酶、***、病原體以及受體等)反應(yīng),結(jié)合形態(tài)學檢查,對抗原作定性、定量、定位檢測的技術(shù)。目前通常選用免疫酶組化間接染色法進行實驗,利用該技術(shù)可進行細胞、亞細胞水平的檢測。 **近幾年,分子生物學研究異?;钴S,但**終還要歸到形態(tài)上來。用免疫組織化學方法對所研究的大分子進行定位,進而深入研究其功能。 分類:免疫組織化學技術(shù)按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等 特點:具有特異性強、靈敏度高及能將形態(tài)研究與功能、代謝研究有機地結(jié)合在一起 實驗標本:實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。 抗體:免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體LabEx多因子檢測技術(shù)--液相懸浮技術(shù)。趨化因子家族

多因子技術(shù)可同時檢測多個樣本的多個指標,如通路中多個相關(guān)蛋白的共檢測。炎性因子

1)LUMINEX應(yīng)用于哪些領(lǐng)域?生物醫(yī)學研究,生物標記物開發(fā),臨床檢測等領(lǐng)域。Luminex技術(shù)主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何?靈敏度取決于開頭的質(zhì)量。對于同樣的抗體對,Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術(shù)。一般檢測靈敏度在pg級。3)對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的?血清、血漿是常用的樣本,每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個蛋白。從各種細胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術(shù)檢測,制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達信息?檢測蛋白和基因的數(shù)目主要取決于試劑盒。蛋白質(zhì)檢測目前比較高可以達到50個左右,基因檢測比較高達500個。5)如何保證檢測結(jié)果的特異性?檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司,產(chǎn)品經(jīng)過了嚴格的質(zhì)量控制。同時,我們檢測公司也有近15年的經(jīng)驗、嚴格的操作程序和質(zhì)量控制體系。6)客戶自己提供抗體,是否可以進行LUMINEX檢測?Luminex和ELISA檢測試劑都需要兩個配套的特異性抗體。我們公司具有開發(fā)Luminex試劑盒的經(jīng)驗。但是,需要一系列的開發(fā)工作才能保證結(jié)果的特異性、重復(fù)性和可靠性。炎性因子

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