磷酸化抗體芯片技術(shù)

來源: 發(fā)布時間:2022-07-05

酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(Elispot)LabEx始終致力于為您的研究需要,提供前沿的多因子技術(shù)平臺,用心服務(wù),現(xiàn)有囊括基因、蛋白、組織、細胞水平包括PCRArray、ELISA,MSD、Luminex、CBA,抗體芯片、多色流式、mIHC及HALO分析等12個專業(yè)的實驗室技術(shù)平臺,助推科研進步!隨著酶免疫分析技術(shù)在醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域的較廣的應(yīng)用,使體外檢測各種細胞因子和抗體研究有了新的突破。在研究免疫應(yīng)答機制時,以往人們常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測體液中游離的細胞因子(CK)或抗體,但由于游離的循環(huán)抗體或CK半衰期不同,使之在體液中不斷地被代謝,而不能確切地反應(yīng)體內(nèi)抗體及CK水平。80年代中期等根據(jù)ELISA技術(shù)的基本原理,建立了體外檢測特異性抗體分泌細胞和CK分泌細胞的固相酶聯(lián)免疫斑點(ELISPOT)技術(shù),因其具有較高的特異性和敏感性,目前正被國內(nèi)外較廣的應(yīng)用,對探索自身免疫系統(tǒng)疾病發(fā)病機制具有重要意義。蛋白分析實驗技術(shù)——MSD超敏電化學(xué)發(fā)光平臺。磷酸化抗體芯片技術(shù)

酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(Elispot)特點:酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結(jié)合了細胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。實驗設(shè)計在96孔培養(yǎng)板上進行,直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì),包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細胞分泌的細胞因子。(由于涉及到細胞培養(yǎng)的過程,對單克隆抗體的要求要遠高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點。)之后,在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細胞培養(yǎng)基(現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟,培養(yǎng)基中可以不再含有血清)、待檢測的細胞以及抗原刺激物進行培養(yǎng)。砷生物標志物LabEx提供蛋白水平檢測服務(wù)!

LUMINEX常見問題及解答(一)1)LUMINEX應(yīng)用于哪些領(lǐng)域?生物醫(yī)學(xué)研究,生物標記物開發(fā),臨床檢測等領(lǐng)域。Luminex技術(shù)主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何?靈敏度取決于開頭的質(zhì)量。對于同樣的抗體對,Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術(shù)。一般檢測靈敏度在pg級。3)對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的?血清、血漿是常用的樣本,每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個蛋白。從各種細胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術(shù)檢測,制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達信息?檢測蛋白和基因的數(shù)目主要取決于試劑盒。蛋白質(zhì)檢測目前可以達到50個左右,基因檢測可達500個。5)如何保證檢測結(jié)果的特異性?檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司,產(chǎn)品經(jīng)過了嚴格的質(zhì)量控制。同時,我們檢測公司也有近15年的經(jīng)驗、嚴格的操作程序和質(zhì)量控制體系。

LabEx多因子檢測技術(shù)--液相懸浮技術(shù)經(jīng)典炎癥十因子、高通量細胞因子初篩液相懸浮芯片:高度特異的捕獲單克隆抗體偶聯(lián)到不同熒光標記的磁珠上,將不同種類磁珠混合后懸浮于96孔微孔板中。進一步加入生物素標記的高親和配對二抗結(jié)合SA-PE進行信號放大,以實現(xiàn)對多種微量細胞因子的有效檢測。利用梯度稀釋的標準品檢測信號構(gòu)建標準曲線,實現(xiàn)大量目標樣本中多因子的同時檢測和準確定量。特點1、既能檢測蛋白,又能檢測核酸2、既能用于臨床,又能用于多學(xué)科科研領(lǐng)域3、真正意義的“高通量”檢測,一次檢測100個指標4、在準確度、精確度、靈敏度方面與ELISA均可達到相似的水平LabEx 免疫組化平臺:包埋,切片,染色,多重熒光組化,以及病理分析(HALO)。

產(chǎn)生組織切片非特異性染色的原因有哪些?如何解決?1)、抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是尤其重要的一條。2)、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。3)、內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細胞多的組織),需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;4)、非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果;5)、DAB孵育時間過長或濃度過高;6)、PBS沖洗不充分,殘留抗體結(jié)果增強著色,在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要;7)、標本染色過程中經(jīng)常出現(xiàn)干片,這容易增強非特異性著色。LabEx 流式平臺:BD C6,BD celesta,BD calibur,12色流式檢測分析。IL-29/IFN-X1 elisa kit檢測服務(wù)

LabEx提供多音字檢測服務(wù)!磷酸化抗體芯片技術(shù)

Luminex液相懸浮芯片是基于高通量微孔板的多重檢測抗體芯片技術(shù)。其基本原理是將高度特異的捕獲單克隆抗體偶聯(lián)到不同熒光標記的磁珠上,將不同種類磁珠混合后懸浮于96孔微孔板中。在檢測時,一束激光照射磁珠上的熒光,識別磁珠標記的捕獲抗體,從而獲知該磁珠可檢測哪種細胞因子,從而實現(xiàn)“定性”作用。進一步,通過加入生物素標記的高親和配對檢測抗體,同步識別磁珠抓取的目標細胞因子,形成“三明治”結(jié)構(gòu),并加入SA-PE偶聯(lián)上生物素,通過另一束激光照射進行信號放大檢測,實現(xiàn)“定量”作用。磷酸化抗體芯片技術(shù)

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