Luminex液相芯片檢測實驗技術(shù)服務(wù)原理:Luminex:應(yīng)用微球和流式細(xì)胞儀的原理,微球內(nèi)部含有三種免疫熒光,通過熒光不同的比例可以區(qū)分500種不同的微球。每種微球可以用來檢測一種不同的蛋白或基因。因此,利用微球技術(shù),可以同時檢測高達(dá)500個蛋白或基因。Luminex技術(shù)的測量結(jié)果在準(zhǔn)確度、精確度、靈敏度方面與ELISA均可達(dá)到相似的水平。Luminex應(yīng)用的熒光編碼微球帶有針對不同目標(biāo)分子的特異性抗體,不同的微球在一定程度上可以自由組合,這樣在一次實驗中可以同時完成多個目標(biāo)分子的分析。多目標(biāo)分子的同時測定可以減少生物樣品的消耗量,節(jié)省成本和測定時間,并且使多種目標(biāo)分子之間相關(guān)性的分析更加準(zhǔn)確。目前,Luminex試劑盒已經(jīng)可以檢測500多種蛋白質(zhì)分子,包括細(xì)胞因子、自身抗體、腫塊物標(biāo)志物等。細(xì)胞因子檢測是一個強(qiáng)大的工具,通過定制識別產(chǎn)生積極反應(yīng)的細(xì)胞因子的獨(dú)特組合。肥胖因子
酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(Elispot)技術(shù)優(yōu)勢(1)單細(xì)胞水平,活細(xì)胞功能檢測:彌補(bǔ)了體液中CK半衰期短的不足,當(dāng)體液中某CK含量較低時,用ELISPOT法檢測具有較高靈敏性。(2)操作簡便經(jīng)濟(jì),可以進(jìn)行高通量篩選:既可檢測自發(fā)分泌細(xì)胞,又可檢測抗原特異性CK分泌細(xì)胞,具有較高特異性,并可觀察藥物治療反應(yīng),且使對CSF中T、B細(xì)胞研究成為可能,對神經(jīng)免疫疾病發(fā)病機(jī)制研究及臨床療效觀察均有重要價值。(3)靈敏度高:在一百萬個陰性細(xì)胞中只要有一個分泌細(xì)胞因子的陽性細(xì)胞即可被檢測出來。靈敏度比傳統(tǒng)ELISA方法高2-3個數(shù)量級。CD40 LigandLabEx提供PCR芯片(PCR Array)技術(shù)服務(wù)!
LUMINEX常見問題及解答(一)1)LUMINEX應(yīng)用于哪些領(lǐng)域?生物醫(yī)學(xué)研究,生物標(biāo)記物開發(fā),臨床檢測等領(lǐng)域。Luminex技術(shù)主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何?靈敏度取決于開頭的質(zhì)量。對于同樣的抗體對,Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術(shù)。一般檢測靈敏度在pg級。3)對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的?血清、血漿是常用的樣本,每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個蛋白。從各種細(xì)胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術(shù)檢測,制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達(dá)信息?檢測蛋白和基因的數(shù)目主要取決于試劑盒。蛋白質(zhì)檢測目前可以達(dá)到50個左右,基因檢測可達(dá)500個。5)如何保證檢測結(jié)果的特異性?檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司,產(chǎn)品經(jīng)過了嚴(yán)格的質(zhì)量控制。同時,我們檢測公司也有近15年的經(jīng)驗、嚴(yán)格的操作程序和質(zhì)量控制體系。
產(chǎn)生組織切片非特異性染色的原因有哪些?如何解決?1)、抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是尤其重要的一條。2)、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。3)、內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;4)、非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果;5)、DAB孵育時間過長或濃度過高;6)、PBS沖洗不充分,殘留抗體結(jié)果增強(qiáng)著色,在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要;7)、標(biāo)本染色過程中經(jīng)常出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。LabEx提供液態(tài)流式技術(shù)(Luminex)服務(wù)!
MSD經(jīng)典10因子推薦:中檢院《CAR-T細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》中提到,使用MSD技術(shù)檢測CAR-T細(xì)胞醫(yī)治后樣本中細(xì)胞因子表達(dá)來評估藥物的安全性和有效性。MSD技術(shù)-電化學(xué)發(fā)光和點(diǎn)陣技術(shù)MESOSCALEDISCOVERY公司的ECL(基于石墨微孔板的電化學(xué)發(fā)光免疫分析)技術(shù)是基于ELISA基本原理的升級,在板底通電從而激發(fā)標(biāo)記物SULFO-TAG發(fā)光并由CCDCamera進(jìn)行信號采集;MSDECL技術(shù)提高免疫分析的靈敏度,延伸了線性范圍。MSD通過點(diǎn)陣技術(shù),在96孔石墨電極板里可實現(xiàn)10個指標(biāo)每孔的檢測,同時實現(xiàn)多個指標(biāo)定量。MSD技術(shù)獨(dú)具一格的“六合一”特點(diǎn):亞fg/ml靈敏度,低背景,多靶點(diǎn)檢測,6個數(shù)量級線性范圍,適用于不同樣本基質(zhì)(血清/血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清,腦脊液,尿液,組織勻漿,細(xì)胞裂解液)(人/猴子/小鼠/大鼠),5-25ul微量樣本檢測。LabEx提供V-PLEX人、小鼠、大鼠:炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、TH1/TH2通路重要指標(biāo)多因子組合檢測限。試劑我們提供;檢測我們來做,助您的時間更有價值!LabEx抗體芯片主要用于蛋白表達(dá)譜、蛋白質(zhì)磷酸化及蛋白質(zhì)相互作用等檢測。自體生長因子
LabEx可以提供包括MSD、Luminex、CBA以及抗體芯片在內(nèi)的多因子檢測服務(wù)。肥胖因子
酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(Elispot)特點(diǎn):酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),能夠在單細(xì)胞水平檢測細(xì)胞因子的分泌情況。實驗設(shè)計在96孔培養(yǎng)板上進(jìn)行,直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì),包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。(由于涉及到細(xì)胞培養(yǎng)的過程,對單克隆抗體的要求要遠(yuǎn)高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點(diǎn)。)之后,在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細(xì)胞培養(yǎng)基(現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟,培養(yǎng)基中可以不再含有血清)、待檢測的細(xì)胞以及抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng)。肥胖因子
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