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生產(chǎn)重組蛋白的酵母表達(dá)系統(tǒng)兼有原核和高等真核系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn),培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)速度快、表達(dá)水平高、操作簡(jiǎn)便、成本低廉,蛋白翻譯后能進(jìn)行正確加工、修飾,合理的空間折疊,使得蛋白的可溶性得到提高,是較優(yōu)的重組真核生物蛋白生產(chǎn)制備工具。其中畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)用較多,與其他表達(dá)系統(tǒng)相比,其較強(qiáng)的AOX1(醇氧化酶)、3-磷酸甘油醛脫氫酶、FLD1(醛脫氫酶)等啟動(dòng)子、蛋白穩(wěn)定持久表達(dá)、表達(dá)效率高、可分泌表達(dá)蛋白、雜蛋白少、翻譯后修飾等優(yōu)點(diǎn)使其成為酵母表達(dá)重組蛋白的優(yōu)先選擇。重組蛋白的應(yīng)用顯著增長(zhǎng),用于重組蛋白表達(dá)和純化的技術(shù)和產(chǎn)品也得以增長(zhǎng)。進(jìn)口BMP-2重組蛋白定制
重組蛋白具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和科研價(jià)值,但是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中使用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法將會(huì)消耗大量的時(shí)間,而傳統(tǒng)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法,在產(chǎn)量上也難以令人滿意。所以重組蛋白大規(guī)模的瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)是近年來的一個(gè)研究熱點(diǎn),已有報(bào)道能放大到 100L反應(yīng)器中生產(chǎn)重組蛋白,產(chǎn)量(分泌型蛋白)可達(dá) 1-10mg/L。不過該方法技術(shù)條件要求高,如質(zhì)粒的純度、轉(zhuǎn)染的效率等。哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中,重組蛋白的表達(dá)水平與許多 因素相關(guān),如轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件、RNA剪接過程、mRNA穩(wěn) 定性、基因在染色體上的整合位點(diǎn)、重組蛋白對(duì)細(xì)胞的毒性作 用以及宿主細(xì)胞的遺傳特性等。進(jìn)口BMP-6重組蛋白高純度、高活性、低內(nèi)毒素,高批次間一致性是選購(gòu)重組蛋白的重點(diǎn)。
為了保證重組蛋白良好的穩(wěn)定性和生物學(xué)活性,通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護(hù)劑。海藻糖是一種以兩個(gè)葡萄糖分子通過 α,α,1,1-糖苷鍵連接的二糖。海藻糖是一種非還原糖,不與氨基酸或蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。它本身不存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi),但哺乳動(dòng)物體內(nèi)卻存在分解海藻糖的酶,且海藻糖作為一種小分子的半抗原,哺乳動(dòng)物對(duì)其免疫反應(yīng)性很低。這使得海藻糖對(duì)live實(shí)驗(yàn)或異種移植等實(shí)驗(yàn)的干擾極小。海藻糖不僅可以防止蛋白在脫水狀態(tài)下改變其結(jié)構(gòu),更能在高溫、低溫、高滲透壓的條件下保留蛋白的生物學(xué)活性。目前,海藻糖以其高效的蛋白保護(hù)性能與相對(duì)低廉的價(jià)格漸漸代替 BSA,是免疫實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品和蛋白類產(chǎn)品添加劑的新寵。
哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)系統(tǒng)在生產(chǎn)重組蛋白中的應(yīng)用中,優(yōu)勢(shì)明顯。具體表現(xiàn)為以下方面,能實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性:哺乳動(dòng)物為真核細(xì)胞,細(xì)胞器可以對(duì)蛋白正確折疊加工。表達(dá)水平高:載體可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高表達(dá)重組蛋白,表達(dá)量可高達(dá)1-3g/L。蛋白表達(dá)高效穩(wěn)定:高效啟動(dòng)子控制,穩(wěn)定表達(dá),并可以選擇多種表達(dá),如瞬時(shí)表達(dá)、穩(wěn)定細(xì)胞株表達(dá)、營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞株表達(dá)(DHFR/GS)、大規(guī)模懸浮細(xì)胞表達(dá)等。適合大規(guī)模蛋白表達(dá):常用的哺乳動(dòng)物表達(dá)宿主細(xì)胞(HEK293和CHO),使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng),可以在一個(gè)月內(nèi)可產(chǎn)生數(shù)克級(jí)蛋白。45.蘇州近岸蛋白專注生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的重組蛋白質(zhì)。
常見的重組蛋白藥物:生長(zhǎng)因子viii,幫助血友病患者形成血塊;非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子),促進(jìn)放療或移植后白細(xì)胞計(jì)數(shù);胰島素,用于糖尿??;IGF1,用于某些生長(zhǎng)問題;干擾素(阿爾法),用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾?。桓蓴_素(β),用于多發(fā)性硬化癥;干擾素(伽瑪),用于慢性肉芽腫??;白細(xì)胞介素-2,殺死病變細(xì)胞;生長(zhǎng)因子,用于生長(zhǎng)因子缺乏癥;組織纖溶酶原actin劑(t-PA),溶解血凝塊,預(yù)防心臟病發(fā)作,減輕其嚴(yán)重程度。重組蛋白干粉如何重溶?進(jìn)口BMP-2重組蛋白定制
重組蛋白,可用于細(xì)胞生長(zhǎng)和分化、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及涉及疾病發(fā)作和進(jìn)展的研究。進(jìn)口BMP-2重組蛋白定制
功能性ELISA是一類以ELISA形式進(jìn)行的、基于體外配體結(jié)合的分析法。該方法用于檢測(cè)目的蛋白與其天然結(jié)合物配體之間(如生長(zhǎng)因子與其受體)的結(jié)合能力。如果在該檢測(cè)中生長(zhǎng)因子能夠與其天然受體相結(jié)合,則該生長(zhǎng)因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號(hào)強(qiáng)度的生長(zhǎng)因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細(xì)胞的檢測(cè)分析或功能性ELISA分析對(duì)其生物學(xué)活性進(jìn)行了檢測(cè),產(chǎn)品頁上會(huì)提供相應(yīng)的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數(shù)據(jù)。在大多數(shù)情況下,這表明沒有進(jìn)行生物活性測(cè)試,但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數(shù)據(jù)的情況下,這些蛋白可用做蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn),蛋白免疫印記陽性對(duì)照(如果是全長(zhǎng)的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結(jié)合試驗(yàn)或ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品。進(jìn)口BMP-2重組蛋白定制
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