單分子陣列數(shù)字ELISA極速

來源: 發(fā)布時間:2024-12-22

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光纖束購自SchottNorthAmericaouthbri,非增強型光澤硅片購自SpecialtyManufacturing(Saginaw,NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人,第7頁鹽酸、無水乙醇和分子生物學(xué)級別的吐溫-20均購自西格瑪-奧德里奇(圣路易斯,密蘇里州)。2.7-μm-二羧基磁珠購自瓦里安公司(加利福尼亞州萊克福斯特)。單克隆抗人TNF-α捕獲抗體、多克隆抗人TNF-α檢測試劑和重組人TNF-α均購自R&DSystems(Minneapolis,MN)。單克隆抗PSA捕獲抗體、單克隆抗PSA檢測試劑和純化的PSA購自BiosPacific(埃默里維爾,加利福尼亞州);使用標(biāo)準(zhǔn)方法將檢測試劑抗體生物素化。1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)和SuperBlock®T-20封閉緩沖液購自ThermoScientific(Rockford,IL)。純化DNA購自綜合DNA技術(shù)公司(Coralville,IA)。 芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA,極速檢測,檢測用時只需要 15-30min!單分子陣列數(shù)字ELISA極速

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    芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測我們的方法利用了亞飛克爾反應(yīng)室陣列(圖1C)我們稱之為單分子陣列(SiMoA)——可以分離和檢測單個酶分子20-24。這種方法借鑒了Walt等人20-23的工作陣列用于研究單個酶的動力學(xué)和抑制作用。我們的目標(biāo)是利用捕獲和檢測單個酶的能力來檢測用酶標(biāo)記的單個蛋白質(zhì)分子。在這個單分子免疫測定的第一步(圖1A),在微球(直徑μm)上形成一個三明治抗體復(fù)合物,結(jié)合的復(fù)合物用酶標(biāo)記,如同常規(guī)的基于微球的ELISA。當(dāng)測定含有極低濃度蛋白質(zhì)的樣品,蛋白質(zhì)的比值分子(以及由此產(chǎn)生的酶標(biāo)記復(fù)合物)與微球的比例很?。ㄍǔP∮?:1),因此含有標(biāo)記免疫復(fù)合物的微球百分比遵循泊松分布,導(dǎo)致單個微球上存在單一免疫復(fù)合物。例如,如果在(3000個分子)的蛋白質(zhì)中捕獲并標(biāo)記了50μM的蛋白質(zhì),并且在200,000個微球上進行標(biāo)記,則珠子,然后,。無法檢測到這些低數(shù)量的酶使用標(biāo)準(zhǔn)檢測技術(shù)(例如,平板閱讀器)的標(biāo)簽,因為熒光染料由每種酶生成的產(chǎn)物擴散到一個大卵試驗體積(通常為),并進入其中需要數(shù)十萬種酶標(biāo)簽才能產(chǎn)生高于該水平的熒光信號背景。 單分子陣列數(shù)字ELISA使用速度單分子POCT產(chǎn)品-數(shù)字化ELISA芯片,幫您數(shù)字化高靈敏檢測,且微量樣本多重指標(biāo)檢測;

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芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA高敏檢測產(chǎn)品;先進新型的單分子檢測方法的普及版;每個生物/醫(yī)學(xué)實驗室都用得起的單分子免疫檢測;使用現(xiàn)有平臺就能做的單分子免疫檢測;

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將200,000個功能化DNA捕獲探針與100μL孵育含有目標(biāo)DNA的溶液(5‘-TTGACGGCGAAGACCTGGATGTATTGCTCCTCTGAACGGTAGCATCTTGACAAC-3‘孵育2小時后,移除DNA靶標(biāo)溶液,用0.2×SSC緩沖液洗滌珠子三次含有0.1%Tween-20的微球重新懸浮并與10nM混合生物素標(biāo)記的信號探針(5‘-TACATCCAGGTCTTCGCCGTCAA/生物素/-3’)對目標(biāo)DNA具有特異性,孵育1小時。然后將珠子在去除信號探針后用含0.1%吐溫-20的0.2×SSC緩沖液洗滌三次。隨后向珠子沉淀中加入10pMS阝G溶液,混勻并混合1小時。然后將珠子分離并在含0.1%吐溫-20的5×PBS緩沖液中洗滌六次。重懸于10μLofPBS中并加載到飛升微升孔陣列上。 芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產(chǎn)品,每個生物實驗室都能用的單分子檢測;

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每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測

珠子以兩種不同的方式讀出。首先,在與100μMresorufin-阝-D孵育1小時后,用熒光板讀出器以100μL方式讀出珠子結(jié)合-半乳糖苷(RGP),一種熒光底物for阝-半乳糖苷酶。在平板閱讀器上,檢測限為15fMofS阝G(圖2)。其次,將珠子加載然后將RGP溶液密封到陣列的孔中,單個酶的信號被允許在反應(yīng)室中積累,并每30秒獲取一次熒光圖像。實驗結(jié)束時獲取陣列的白光圖像以識別含有珠子的孔(含有珠子的孔散射光與空井不同)。熒光圖像用于確定哪些微球具有相關(guān)的結(jié)合酶(從時間變化的熒光圖像中強度增加)。圖2顯示了微球中含酶的比例與總體S阝G濃度的關(guān)系的對數(shù)-對數(shù)圖。檢測到的比較低酶偶聯(lián)物濃度為350飛摩爾(zM),并通過外推信號等于的酶濃度計算得出的檢測限(LOD)。 芯棄疾JX-8B單分子ELISA檢測產(chǎn)品,微量樣本可同時測2-4個指標(biāo);!單分子技術(shù)數(shù)字ELISA穩(wěn)定性

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芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA:芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA  具有超敏的優(yōu)勢:

超敏:芯棄疾.數(shù)字ELISA,與Simoa同樣的檢測方案,將檢測結(jié)果二維化,使用成像方式,可精確量檢測區(qū)多少個微球載體上發(fā)生免疫反應(yīng),具有陽性熒光信號,理論可達fg級;使用常規(guī)ELISA試劑,測試IL-6等演示指標(biāo),也可輕松達到亞pg級(0.2-0.5pg/mL);使用顯微圖像處理方法,得到數(shù)萬個磁珠中,陽性的個數(shù)和亮度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到待測指標(biāo)的濃度。極低濃度時,檢測信息為數(shù)字化信號,有效提高檢測靈敏度到0.2 pg/ml級; 單分子陣列數(shù)字ELISA極速