免疫組化技術,是應用免疫學基本原理—抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry),是研究蛋白質在組織細胞中分布、功能狀態(tài)及動態(tài)變化的強有力工具。免疫組化技術具有高靈敏度、高選擇性和無放射性污染的特點,其結果容易數字化和圖像處理,是一種實用性和準確性高的分子生物學技術。在臨床醫(yī)學研究中,免疫組化被廣泛應用于Ca組織結構及特異性結構物的鑒定,幫助醫(yī)生確定病變的類型、分級和分期,進一步指導臨床醫(yī)療和預后判斷。免疫組化用于Tumor診斷,可確定細胞特征。南通免疫組化價格
進行多重免疫組化時,為了確保結果準確需避免抗體交叉反應,策略如下:1、選用高特異性抗體,查驗證明資料。2、使用不同物種一抗,配對特異性二抗減風險。3、優(yōu)化抗體濃度和孵育條件,避免非特異性結合。4、利用TSA等技術,清洗步驟中減少交叉反應。5、挑選光譜分離的熒光染料,防信號干擾。6、強化洗滌步驟,去除非結合抗體。7、應用阻斷劑預防非特異性結合。8、設立陰/陽性對照,驗證特異性。9、有序進行染色,必要時淬滅前一信號。嘉興病理切片免疫組化原理免疫組化在醫(yī)學研究和臨床診斷中廣泛應用。
免疫組化7項檢查的具體內容因實驗室和診斷需求而異,但通常涵蓋以下方面:1、ER和PR:診斷的關鍵標志物,陽性通常表明患者可能受益于內分泌醫(yī)療。2、HER-2(人表皮生長因子受體-2):重要標志物,陽性者可能需要靶向醫(yī)療。3、Ki-67:用于評估多種Tumor的增殖活性,數值越高,Tumor復發(fā)、轉移的可能性越大。4、P53:抑Ca基因,突變與多種Tumor的發(fā)生、發(fā)展有關。5、EGFR(表皮生長因子受體):在Tumor中表達,過表達或突變與Tumor惡性程度和耐藥性相關。6、CK(細胞角蛋白):標記不同的上皮細胞類型,用于確定Tumor的組織來源。7、其他特定Tumor標志物:根據具體Tumor類型和診斷需求而定,如針對特定類型的Tumor標志物。
在免疫組化研究中,優(yōu)化組織微陣列(TMA)設計對提升研究效率與數據質量至關重要。關鍵策略包括:確保樣本多樣性以反映整體臨床病理特征;精選組織芯位置,規(guī)避非典型區(qū)域,平衡布局防污染;設置陽性、陰性對照芯,驗證染色特異性和一致性;針對異質性Tumor多點取樣;依據統計學原則確定樣本量,確保分析效力;實施標準化與質量控制流程,保障實驗連貫可靠;預先規(guī)劃數據收集與分析方案,考慮自動化圖像分析及異常數據處理;初期可試行小規(guī)模TMA,逐步迭代優(yōu)化。多重免疫組化技術進步,實現同時檢測多種蛋白表達。
免疫組化技術中的信號放大方法主要包括以下幾種:1、TSA技術(酪胺信號放大技術): TSA技術基于酪胺的過氧化物酶反應,產生大量的酶促產物,這些產物能與周圍的蛋白殘基結合,使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結合。該方法可以在一張組織切片上實現7-9種靶標的標記,有效提高了檢測的靈敏度和準確性。2、多聚酶法:通過多聚酶的作用,可以在抗體上形成大量的酶分子聚集體,從而增強信號的強度。這種方法在免疫組化檢測中廣泛應用,能夠明顯提高檢測的靈敏度。3、銀增強法:利用銀離子在特定條件下被還原成金屬銀的特性,可以在抗體上形成一層銀沉積物,從而放大信號。這種方法在免疫電鏡中特別有用,能夠觀察到更加清晰的免疫復合物結構。4、酶蛋白復合物法:通過將酶與抗體或其他蛋白質結合形成復合物,可以在檢測過程中產生更強的信號。這種方法結合了酶的催化活性和抗體的特異性,使得信號放大更加高效和準確。使用哪種成像技術能有效提高免疫組化圖像的分辨率?嘉興組織芯片免疫組化掃描
免疫組化技術有助于鑒別不同的細胞類型。南通免疫組化價格
免疫組化實驗中的對照實驗設置對于驗證實驗結果的準確性和可靠性至關重要。以下是對照實驗設置的主要步驟和要點:1、陽性對照:選擇已知含有目的抗原的組織切片或細胞樣本作為陽性對照。與待檢樣本同步進行免疫組化實驗流程,包括一抗、二抗的孵育和顯色反應。目的是驗證實驗流程的有效性,確保在抗原存在的情況下能夠產生陽性信號。2、陰性對照:選擇不表達目的抗原的組織切片或細胞樣本作為陰性對照。同樣與待檢樣本同步進行實驗流程。目的是檢測實驗過程中是否存在非特異性信號或假陽性結果。陰性對照應呈陰性反應。3、空白對照:省略一抗孵育步驟, 進行二抗孵育和顯色反應。用于排除二抗引起的非特異性背景染色。4、同型對照:使用與一抗種屬來源一致、亞型相同、免疫球蛋白相同的抗體作為對照。目的是確定目的蛋白與一抗的結合是特異性的,而不是與其他蛋白質之間的非特異性結合。5、抑制對照:通過添加過量的未標記特異性抗體與熒光抗體混合,抑制其與靶抗原的結合。結果應呈陰性或明顯減弱的熒光,進一步確認實驗結果的特異性。南通免疫組化價格