CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學(xué)評估。CASA系統(tǒng)可用來定量分析精子頭部形態(tài)學(xué)、中段甚至主段的形態(tài),可以把精子頭部和中段分類為正?;蛘卟徽#€可以給出頭部和中段尺度、頭部橢圓率和勻稱性的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和中位數(shù),以及對染色的精子頂體區(qū)進(jìn)行測量[3]。
與人工操作相比,自動化系統(tǒng)更具客觀性,精確度和重復(fù)性的潛力[4]。精確度和重復(fù)性不低于7%[5],這優(yōu)于有經(jīng)驗的技術(shù)人員的手工評估。兩個研究已經(jīng)提示在CASA結(jié)果與生育力之間存在***聯(lián)系。Coetzee等發(fā)現(xiàn)自動分析的正常精子形態(tài)的結(jié)果是預(yù)示體外受精率和妊娠率的有意義指標(biāo)[6]。Garrett等發(fā)現(xiàn)**中能與透明帶結(jié)合的、具有某些頭部形態(tài)特征的精子所占的百分比(Z%),和直線速度(VSL)的精子的百分比,與大樣本的低生育力夫婦的自然妊娠率是有***且**的關(guān)系。Z%和VSL與生育力間的關(guān)系顯示是連續(xù)的,而且沒有顯示臨界值;高于臨界值,妊娠率也不會進(jìn)一步增加[7]。 Hamilton Thorne精子分析儀的操作簡單易懂,用戶無需具備專業(yè)知識也能夠輕松上手使用。香港牛精子分析負(fù)相差
二、生化及免疫學(xué)檢驗:5、精漿肉堿測定【正常參考值】濃度為239.56±l05.59umol/L。【臨床意義】精漿肉堿測定精漿中的肉堿主要由附睪分泌,其次是精囊。精漿中肉堿分為游離肉堿和乙酰肉堿二種,附睪中含高濃度的肉堿,主要與精子在附睪成熟時所需的能量來源有關(guān)。現(xiàn)認(rèn)為精漿肉堿含量和果糖含量的變化,常反映附睪、精囊的功能。精漿肉堿及果糖含量正常,表明附睪、精囊功能正常。當(dāng)肉堿含量高于正常的50%,而果糖含量降低,則提示精囊功能障礙,附睪功能正常;精漿肉堿約為正常含量的50%左右,果糖含量正常,說明附睪功能障礙,精囊功能正常;而肉堿急劇下降,果糖含量亦減少,表示精囊、附睪功能均發(fā)生障礙。6、抗精子抗體(AsAb)測定【正常參考值】陰性?!九R床意義】AsAb檢測對不育原因檢查有重要臨床意義。存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb,可抑制精子的活動,干擾精子的運(yùn)行,阻礙精子穿透及精卵結(jié)合,使受精發(fā)生障礙。即使已經(jīng)受精,也可能影響發(fā)育中的胚胎,造成免疫性流產(chǎn)。不育夫婦AsAb陽性者占25%-30%,當(dāng)精子輸出管道受阻、睪丸損傷、炎癥、附睪等生殖系***時,系精子外逸而產(chǎn)生的自身抗體。前向運(yùn)動精子分析精確溫度控制HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù),鞭打頻率(BCF)?:精子曲線路徑跨越其平均路徑的平均頻率。
世界衛(wèi)生組織(WHO)《人類精液及精子—宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊》于1980年***出版,以滿足臨床與科研對人類精液標(biāo)準(zhǔn)化檢測程序日益增長的需求。該手冊是人類精液實驗室檢查和處理程序及方法的標(biāo)準(zhǔn)操作指南,旨在提高精液分析的質(zhì)量和提高不同實驗室結(jié)果的可比性。在過去40年里,該手冊進(jìn)行了4次修訂與補(bǔ)充(1987年、1992年、1999年和2010年),內(nèi)容涉及精液檢查的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序、精子功能、精漿生化、精液處理與冷凍以及質(zhì)量保證等,已成為國際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn),被世界各地臨床和實驗室***使用。中國衛(wèi)生部已在2003年將其納入人類輔助生殖技術(shù)規(guī)范。WHO《人類精液檢查與處理實驗室手冊(第5版)》精液參考值的數(shù)據(jù)是來自全球3大洲8個國家的前瞻性、多中心臨床研究的結(jié)果,通過循證醫(yī)學(xué)研究獲得的精液參數(shù)參考值具有里程碑式意義。自2010年出版以來成為WHO很受歡迎的出版物之一,即使在**近幾年其下載量也在穩(wěn)步增長。它是男科實驗室及全球范圍內(nèi)開展精液分析操作的其他實驗室、醫(yī)院和研究機(jī)構(gòu)使用的標(biāo)準(zhǔn)操作手冊。該手冊在國際大會、科學(xué)會議、以及WHO合作中心、專業(yè)學(xué)會和其他學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)的培訓(xùn)項目中進(jìn)行了***傳播。截止到2021年,已被3000余篇同行評議論文和評論引用。
通過結(jié)果的生物學(xué)意義對結(jié)果質(zhì)量進(jìn)行評估?當(dāng)所有具生物學(xué)意義的參數(shù)在測試中表現(xiàn)出較小的可變性時則方法學(xué)可變性亦較低方法學(xué)可變性低則結(jié)果質(zhì)量就高。CASA系統(tǒng)獲得的數(shù)值與直觀評估獲得的數(shù)值進(jìn)行分析和比較在精子數(shù)量和綜合運(yùn)動性上具有較好的相關(guān)性而·131·中國優(yōu)生與遺傳雜志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向運(yùn)動精子百分率上的相關(guān)性較低]。Holt等報道了在常規(guī)實驗條件下采用五種不同的CASA系統(tǒng)對**參數(shù)值進(jìn)行比較,其結(jié)果為:采用同一個測定池由不同的操作者測定**參數(shù);變異系數(shù)(CV)是29%?活動精子比率的CV為24%?平均路徑速度(VAP)的CV為43?85%。作者們指出該分析結(jié)果不應(yīng)看作是不同CASA系統(tǒng)間的工作情況的比較?實際上它揭示了操作者的錯誤是差異的主要來源。目前有待于尋找進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn)來評估CASA變量的結(jié)果質(zhì)量。精子***的生物學(xué)功能是使卵細(xì)胞授精?因此用夫婦中的授精結(jié)果來考察精子運(yùn)動性是合理的?只有在該基礎(chǔ)上能夠確定活動性參數(shù)的重要性。輔助生殖技術(shù)(授精I(xiàn)VF)的發(fā)展使檢測精子質(zhì)量與各參數(shù)間的關(guān)系的比較成為可能;同樣可以驗證CASA測定結(jié)果與精子真實質(zhì)量間的相關(guān)性有利于CASA結(jié)果質(zhì)量的提高。男性精液檢測主要依賴計算機(jī)輔助精子分析儀(computer assistant semen analyses,CASA)。
醫(yī)生處置質(zhì)量是指診斷質(zhì)量?是以當(dāng)今醫(yī)學(xué)科學(xué)知識、技術(shù)為基礎(chǔ)依據(jù)癥狀來完成的。CASA系統(tǒng)可以為醫(yī)生提供優(yōu)于傳統(tǒng)精子分析的手段和快速準(zhǔn)確的分析結(jié)果[5]。CASA在醫(yī)生處置質(zhì)量方面的特點在于:①當(dāng)CASA系統(tǒng)的參數(shù)設(shè)定和樣品的處理方式(溫度、稀釋法、緩沖液)確定時?通過個體內(nèi)和個體間的比較?CASA的精子活力重復(fù)性明顯好于直觀評估[6]。②實驗室數(shù)據(jù)資料是質(zhì)量的一部分?CASA系統(tǒng)所有數(shù)據(jù)都是直接在線獲得的?因此明顯優(yōu)于其他方法[6]?記錄傳遞到數(shù)據(jù)庫的過程無錯誤發(fā)生?可清楚準(zhǔn)確地打印出結(jié)果。所有的數(shù)據(jù)可直接轉(zhuǎn)換到數(shù)據(jù)庫、能夠?qū)?**前和***后測定的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較[9]、質(zhì)量控制數(shù)據(jù)的采集與保存、每天的標(biāo)本測試記錄以及許多其他報告等等?如此大量數(shù)據(jù)的處理只有在計算機(jī)中才能完成。但是CASA系統(tǒng)的參數(shù)設(shè)定也許限制了其質(zhì)量?特別是在精子形態(tài)學(xué)檢查中?通過CASA系統(tǒng)對精子形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行分析[7]?這些特征(細(xì)胞大小、形狀、光學(xué)密度、尾的存在以及其它)可由操作者選擇?這樣就會引起同一標(biāo)本在不同實驗室或不同分析者測得的結(jié)果一致性較差[8]。就形態(tài)學(xué)分析而言?傳統(tǒng)方法的可變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于CASA分析。精子分析儀能分析與精子運(yùn)動功能相關(guān)的各種參數(shù)。全自動化精子分析DCL
精子分析儀參數(shù),精子頭側(cè)擺幅度(ALH)?:精子頭關(guān)于其平均路徑的側(cè)向位移幅度。香港牛精子分析負(fù)相差
精子分析儀工作原理
以灰度識別CASA為例,采用高分辨率的攝影技術(shù)與顯微鏡結(jié)合,**標(biāo)本液化后吸入計數(shù),通過顯微鏡放大后,用圖像采集系統(tǒng)獲取精子動、靜態(tài)圖像后輸入計算機(jī)。根據(jù)設(shè)定的精子大小和灰度、精子運(yùn)動移位及運(yùn)動參數(shù),對采集圖像進(jìn)行精子密度、活動力、活動率、運(yùn)動特征等幾十項檢驗項目動態(tài)分析,由計算機(jī)處理后,打印出“**分析檢查報告以及精子動態(tài)特征分布圖”。一次能對1000個精子進(jìn)行動態(tài)檢測分析,2-3分鐘即可完成檢測 [1]。
優(yōu)點:
操作簡便,用量少,檢測速度快,重復(fù)性優(yōu)于人工檢測,并且能夠快速、準(zhǔn)確的測定精子密度、活力、精子分級等,還可提供精子運(yùn)動狀態(tài)的多種參數(shù)等。
缺點:
影響分析結(jié)果的因素較多,除**本身性質(zhì)所含的固有誤差外,不同的精子計數(shù)池的相對準(zhǔn)確性和精確性可產(chǎn)生明顯不一致的效果。 香港牛精子分析負(fù)相差