精子計(jì)數(shù)是在顯微鏡下計(jì)算一次排出的精液中精子的數(shù)量將精子計(jì)數(shù)值乘以精液量就可得出一次**的量。精液液化后將樣本按一定比例稀釋和固定后,滴于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上,在顯微鏡下計(jì)數(shù)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)內(nèi)的所有精子數(shù)并換算為每m1內(nèi)所含精子數(shù)。此外還可用電子細(xì)胞計(jì)數(shù)儀經(jīng)調(diào)整閾值設(shè)置后計(jì)數(shù)精子數(shù)量。將已經(jīng)液化的精液標(biāo)本均勻混合,用白細(xì)胞計(jì)數(shù)吸管吸精液至0.5刻度,再吸稀釋液至11刻度,振蕩三分鐘,然后置于血球計(jì)數(shù)板內(nèi),計(jì)數(shù)二大格(每格面積1平方毫米)之精子數(shù),在尾數(shù)后加5個(gè)“0”即得每毫升精液內(nèi)精子數(shù)。例如計(jì)數(shù)為1280個(gè),則每毫升精子應(yīng)為128,000,000。精液稀釋液之配制:重碳酸鈉5克、福爾馬林1毫升、蒸餾水加至100毫升。稀釋液內(nèi)重碳酸鈉有消化粘液的作用,福爾馬林有使精子制動(dòng)的作用。如精液之稠度過(guò)高而不易吸取時(shí),可以精液1毫升混勻于稀釋液19毫升內(nèi),稀釋后進(jìn)行計(jì)數(shù)。如精子的數(shù)目極少,亦可改為稀釋10倍計(jì)數(shù)。每次排精75%的精子是從附睪尾部所貯存的,還有25%是由輸精管道的其他部分來(lái)的,因此單憑一次排精的精子計(jì)數(shù)來(lái)衡量睪丸生精機(jī)能是不***的。只有在排精后間隔4-5天以后多次精液檢查,才能比較正確地從這些精子計(jì)數(shù)來(lái)反映睪丸的生精機(jī)能。HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù),擺動(dòng)性(WOB)?:實(shí)際的曲線路徑關(guān)于平均路徑的擺動(dòng)值。北京瀕危物種精子分析BCF
采集精液前5~7天內(nèi)必須停止性生活,并且不得有**、夢(mèng)遺等情況,還應(yīng)禁煙戒酒,忌服對(duì)生精功能有影響的藥物等。采取精液時(shí)間以晨起為佳,采精前用溫水將雙手、**,尤其是**洗凈??刹捎?*法或電動(dòng)按摩**法引起排精。精液的排出具有一定順序,開(kāi)頭部分來(lái)自前列腺、附睪及壺腹,伴有大量精子,***部分來(lái)自精囊,故應(yīng)收集整份精液,不要遺漏任何部分,尤其是開(kāi)頭部分。正因?yàn)橐讈G失精液的***部分,故不能用體外**法收集精液。盛精液的容器應(yīng)干凈、無(wú)菌、干燥,采精前容器的溫度應(yīng)與室溫相同;瓶子不應(yīng)過(guò)大,但瓶口不應(yīng)過(guò)小,以免將精液射出瓶外;還應(yīng)貼上標(biāo)簽,記錄姓名及取精時(shí)間。在冷天應(yīng)將精液標(biāo)本保溫,放置在貼身內(nèi)衣袋中,不可傾斜或倒置,盡可能在1小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。上海前向運(yùn)動(dòng)精子分析BCF精子分析系統(tǒng)較傳統(tǒng)的分析法比較,具有速度快、量比性好、準(zhǔn)確性高、為臨床和科研提供客觀的檢測(cè)依據(jù)。
CASA精子運(yùn)動(dòng)速度和運(yùn)動(dòng)軌跡特征主要參數(shù)有:①軌跡速度(VCL):也稱(chēng)曲線速度,即精子頭部沿其實(shí)際行走曲線的運(yùn)動(dòng)速度。②平均路徑速度(VAP):精子頭沿其空間平均軌跡的運(yùn)動(dòng)速度,這種平均軌跡是計(jì)算機(jī)將精子運(yùn)動(dòng)的實(shí)際軌跡平均后計(jì)算出來(lái)的,可因不同型號(hào)的儀器而有所改變。③直線運(yùn)動(dòng)速度(VSL):也稱(chēng)前向運(yùn)動(dòng)速度,即精子頭部直線移動(dòng)距離的速度。④直線性(LIN):也稱(chēng)線性度,為精子運(yùn)動(dòng)曲線的直線分離度,即VSL/VCL。⑤精子側(cè)擺幅度(ALH):精子頭實(shí)際運(yùn)動(dòng)軌跡對(duì)平均路徑的側(cè)擺幅度,可以是平均值,也可以是最大值。不同型號(hào)的CASA系統(tǒng)由于計(jì)算方法不一致,因此相互之間不可直接比較。⑥前向性(STR):也稱(chēng)直線性,計(jì)算公式為VSL/VAP,亦即精子運(yùn)動(dòng)平均路徑的直線分離度。⑦擺動(dòng)性(WOB):精子頭沿其實(shí)際運(yùn)動(dòng)軌跡的空間平均路徑擺動(dòng)的尺度,計(jì)算公式為VAP/VCL。⑧鞭打頻率(BCF):也稱(chēng)擺動(dòng)頻率,即精子頭部跨越其平均路徑的頻率。⑨平均移動(dòng)角度(MAD):精子頭部沿其運(yùn)動(dòng)軌跡瞬間轉(zhuǎn)折角度的時(shí)間平均值。⑩運(yùn)動(dòng)精子密度:每毫升精液中VAP>0μm/s的精子數(shù)。
精子分析儀是計(jì)算機(jī)技術(shù)和圖像處理技術(shù)結(jié)合的**分析儀器設(shè)備,通過(guò)顯微鏡下攝像和計(jì)算機(jī)快速分析多個(gè)視野內(nèi)精子的運(yùn)行軌跡,客觀記錄了精子的密度、活動(dòng)力、活動(dòng)率和存活率等各項(xiàng)參數(shù)。計(jì)算機(jī)輔助**分析儀由硬件系統(tǒng)和軟件系統(tǒng)組成。硬件系統(tǒng)主要由顯微攝像系統(tǒng)、圖像采集系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)等四大系統(tǒng)構(gòu)成。此外,儀器一般配有**樣品盒,以確保單層取樣[1]。1.顯微攝像系統(tǒng):由顯微鏡及CCD組成??梢詫?biāo)本信號(hào)通過(guò)顯微放大由CCD傳輸?shù)接?jì)算機(jī)2.圖像采集系統(tǒng):由圖像卡構(gòu)成,其功能是對(duì)CCD信號(hào)進(jìn)行抓拍、識(shí)別、預(yù)處理后,將成熟信號(hào)輸送到計(jì)算機(jī)。3.恒溫系統(tǒng):由加溫和保溫設(shè)備組成。加溫是通過(guò)熱吹風(fēng)機(jī)不斷將適宜的溫度熱風(fēng)鼓入封閉保溫罩內(nèi),提供穩(wěn)定、可靠的檢查環(huán)境。4.計(jì)算機(jī)系統(tǒng):對(duì)圖像信號(hào)進(jìn)行***系統(tǒng)的加工處理,對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行輸出和存儲(chǔ)的設(shè)備。軟件系統(tǒng)采用**的精子質(zhì)量分析軟件,利用現(xiàn)代化的計(jì)算機(jī)識(shí)別技術(shù)和圖像處理技術(shù),對(duì)精子的動(dòng)靜態(tài)特征進(jìn)行***的量化分析,對(duì)精子的密度、活力、活率、運(yùn)動(dòng)軌跡等特征進(jìn)行量的檢測(cè)分析精子分析,平均角位移(MAD)?:精子頭沿其曲線軌跡瞬時(shí)轉(zhuǎn)折角度的時(shí)均J對(duì)值?。
美國(guó)HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析儀已經(jīng)被FDA和國(guó)內(nèi)外毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室所使用。本試驗(yàn)研究目的對(duì)精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在大鼠附睪精子計(jì)數(shù)結(jié)果的比較驗(yàn)證。方法選取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,對(duì)三批次雄鼠的精子計(jì)數(shù)進(jìn)行比較。健康雄鼠通過(guò)戊巴比妥鈉麻醉實(shí)施安樂(lè)死后,取左側(cè)附睪尾稱(chēng)重,將附睪尾部放入37℃預(yù)熱的含有M199培養(yǎng)液平皿中,剪碎附睪尾,放入培養(yǎng)箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子懸液,用M199培養(yǎng)液進(jìn)行一定倍數(shù)的稀釋,混勻后,取1滴稀釋液,滴入精子分析儀**載玻片上,將載玻片放入TOXIVOS精子分析儀載物臺(tái),進(jìn)行精子計(jì)數(shù),同時(shí)吸取稀釋后的精子懸液滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi),通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù),比較兩種計(jì)數(shù)方法的差異性。結(jié)果***批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為165.9±91.7,140.0±59.6。三個(gè)批次的精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的精子計(jì)數(shù)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論精子分析儀是一種方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理學(xué)研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。所有操作人員都應(yīng)接受規(guī)范的CASA分析儀使用培訓(xùn),嚴(yán)格按照使用指南進(jìn)行操作?。廣州Hamilton Thorne精子分析負(fù)相差
全自動(dòng)精子分析儀在臨床Z療中展現(xiàn)了明顯的優(yōu)勢(shì)。北京瀕危物種精子分析BCF
精子分析儀使用方法儀器的使用方法因型號(hào)、廠家差異不盡相同,操作人員上崗前必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格培訓(xùn),了解工作原理、操作規(guī)程、校正方法等,使用前必須仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。一般儀器都會(huì)經(jīng)歷如下操作步驟[1]:開(kāi)機(jī)接通電源,打開(kāi)計(jì)算機(jī)輔助**分析系統(tǒng)。1.輸入患者信息及**理學(xué)檢查結(jié)果。2.加樣取液化的**1滴,滴入精子計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中,置顯微鏡操作平臺(tái)上,點(diǎn)擊“活動(dòng)顯示”菜單,調(diào)節(jié)好顯微鏡焦距,顯示器上即可顯示待測(cè)標(biāo)本的精子運(yùn)動(dòng)圖像。3.分析點(diǎn)擊“計(jì)算分析”菜單,系統(tǒng)進(jìn)入自動(dòng)分析狀態(tài),圖像顯示區(qū)出現(xiàn)精子分割圖像并進(jìn)行分析。4.打印報(bào)告分析結(jié)束后,可根據(jù)需要打印出分析結(jié)果。北京瀕危物種精子分析BCF