通過結(jié)果的生物學(xué)意義對結(jié)果質(zhì)量進行評估?當(dāng)所有具生物學(xué)意義的參數(shù)在測試中表現(xiàn)出較小的可變性時則方法學(xué)可變性亦較低方法學(xué)可變性低則結(jié)果質(zhì)量就高。CASA系統(tǒng)獲得的數(shù)值與直觀評估獲得的數(shù)值進行分析和比較在精子數(shù)量和綜合運動性上具有較好的相關(guān)性而·131·中國優(yōu)生與遺傳雜志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向運動精子百分率上的相關(guān)性較低]。Holt等報道了在常規(guī)實驗條件下采用五種不同的CASA系統(tǒng)對**參數(shù)值進行比較,其結(jié)果為:采用同一個測定池由不同的操作者測定**參數(shù);變異系數(shù)(CV)是29%?活動精子比率的CV為24%?平均路徑速度(VAP)的CV為43?85%。作者們指出該分析結(jié)果不應(yīng)看作是不同CASA系統(tǒng)間的工作情況的比較?實際上它揭示了操作者的錯誤是差異的主要來源。目前有待于尋找進一步的標準來評估CASA變量的結(jié)果質(zhì)量。精子***的生物學(xué)功能是使卵細胞授精?因此用夫婦中的授精結(jié)果來考察精子運動性是合理的?只有在該基礎(chǔ)上能夠確定活動性參數(shù)的重要性。輔助生殖技術(shù)(授精IVF)的發(fā)展使檢測精子質(zhì)量與各參數(shù)間的關(guān)系的比較成為可能;同樣可以驗證CASA測定結(jié)果與精子真實質(zhì)量間的相關(guān)性有利于CASA結(jié)果質(zhì)量的提高。不同品牌CASA分析的結(jié)果差異較大,因此,更高效精確的精液質(zhì)量檢測系統(tǒng)對促進男科學(xué)發(fā)展具有重要的意義。廣州前向運動精子分析LIN
精子手工計數(shù)原理及操作方法1.原理:將精液用適當(dāng)?shù)南♂屢鹤饕欢肯♂尯螅靹蜃⑷胗嫈?shù)池內(nèi)計數(shù),再算出每毫升精液中精子數(shù)。2.方法(按照***版第四版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》)1).于小試管內(nèi)加精子稀釋液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀釋液內(nèi)混勻。2).充分搖勻后,滴入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池內(nèi),靜置1~2分鐘,待精子下沉后,以精子頭部作為基準進行計數(shù)。3.計算1).如每個**中方格內(nèi)精子少于10個,應(yīng)計數(shù)所有25個中方格內(nèi)的精子數(shù)。2).如每個**中方格內(nèi)精子在10~40個,應(yīng)計10個中方格內(nèi)的精子數(shù)。3).如每個**中方格內(nèi)精子多于40個,應(yīng)計數(shù)5個中方格內(nèi)的精子數(shù)。公式:精子數(shù)=計數(shù)結(jié)果/計數(shù)中方格×25×1/計數(shù)池高度×20×103/ml=計數(shù)結(jié)果/計數(shù)中方格×1/計數(shù)池高度×5×103/ml香港CASA精子分析精確溫度控制HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù),擺動性(WOB)?:實際的曲線路徑關(guān)于平均路徑的擺動值。
方法:使用兩種已知濃度的質(zhì)控乳膠珠溶液,1份濃度為(35±5)×106/ml,另1份濃度為(18.0±2.5)×106/ml,評價4種計數(shù)方法的準確性和精確性,并比較4種方法計數(shù)精液的結(jié)果。結(jié)果:計數(shù)乳膠珠時,CellVU計數(shù)池的結(jié)果**接近已知濃度,分別為(39.70±4.76)、(19.09±2.02)×106/ml,變異系數(shù)(CV)值分別為12.80%和10.58%;血細胞計數(shù)池和Makler計數(shù)池結(jié)果均高于已知濃度,前者為(44.84±4.86)×106/ml、(21.04±1.87)×106/ml,CV值分別為10.81%和8.89%,后者為(52.36±7.78)×106/ml、(24.54±3.67)×106/ml,CV值分別為14.86%和14.96%;CASA系統(tǒng)結(jié)果低于已知濃度,為(28.53±2.06)、(14.62±0.95)×106/ml,但CV值比較低,分別為7.22%和6.50%。計數(shù)精液時,CellVU計數(shù)池與CASA系統(tǒng)結(jié)果差異無***性(P=0.71),分別為(45.28±34.52)、(41.96±31.93)×106/ml,血細胞計數(shù)池和Makler計數(shù)池結(jié)果差異無***性(P=0.14),分別為(76.98±59.90)、(63.89±53.84)×106/ml,CellVU計數(shù)池、CASA系統(tǒng)與血細胞計數(shù)池、Makler計數(shù)池結(jié)果間差異***(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:計數(shù)精液時,CASA系統(tǒng)與CellVU計數(shù)結(jié)果差異無***性。各實驗室可選擇合適的手工或CASA計數(shù)方法。
CASA系統(tǒng)進行**分析應(yīng)注意以下幾點:3.2**分析儀閾值的確定(1)精子灰度、對比度閾值:由于分析儀是根據(jù)灰度的高低來判斷精子的真?zhèn)?,對亮度和對比度要求特別高,檢測時應(yīng)多次試用,尋找能準確識別精子的比較好灰度閾值[8]。(2)碎片:測定精子濃度準確性受**中細胞成份和非精子的顆粒物質(zhì)的干擾,測定活動精子的百分率也受精子中非精子物質(zhì)的影響[9],這些也是需要注意的。對于系統(tǒng)誤認為精子的非精子成分,如精原細胞、白細胞和非白細胞顆粒等,可人為準確記數(shù)后在可刪除雜質(zhì)一欄將其舍去。3.3出現(xiàn)1次異常結(jié)果應(yīng)間隔復(fù)查反復(fù)檢查2?3次方能得出比較正確的結(jié)果。3.4對于無精子的患者應(yīng)仔細進行視野檢查注意不要將雜質(zhì)誤認為精子計數(shù)在內(nèi),應(yīng)將**3000ɡ離心15分鐘后,再涂片檢查,確認無精后再出報告。Hamilton Thorne精子分析儀具備快速和高效的分析功能,能夠在短時間內(nèi)處理大量樣本,提高工作效率。
CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學(xué)評估。CASA系統(tǒng)可用來定量分析精子頭部形態(tài)學(xué)、中段甚至主段的形態(tài),可以把精子頭部和中段分類為正常或者不正常,還可以給出頭部和中段尺度、頭部橢圓率和勻稱性的均數(shù)、標準差和中位數(shù),以及對染色的精子頂體區(qū)進行測量[3]。與人工操作相比,自動化系統(tǒng)更具客觀性,精確度和重復(fù)性的潛力[4]。精確度和重復(fù)性不低于7%[5],這優(yōu)于有經(jīng)驗的技術(shù)人員的手工評估。兩個研究已經(jīng)提示在CASA結(jié)果與生育力之間存在***聯(lián)系。Coetzee等發(fā)現(xiàn)自動分析的正常精子形態(tài)的結(jié)果是預(yù)示體外受精率和妊娠率的有意義指標[6]。Garrett等發(fā)現(xiàn)**中能與透明帶結(jié)合的、具有某些頭部形態(tài)特征的精子所占的百分比(Z%),和直線速度(VSL)的精子的百分比,與大樣本的低生育力夫婦的自然妊娠率是有***且**的關(guān)系。Z%和VSL與生育力間的關(guān)系顯示是連續(xù)的,而且沒有顯示臨界值;高于臨界值,妊娠率也不會進一步增加[7]。?精子分析可以分析參數(shù)有,曲線速率(VCL)?:精子頭沿其實際曲線運動的時均速率。快速運動精子分析精子動力分析
全自動精子分析儀極大提高臨床檢驗水平,廣泛應(yīng)用于泌尿科,男性科以及計劃生育、優(yōu)生優(yōu)育研究等。廣州前向運動精子分析LIN
五、精子活動力檢測[正常參考值]**后30-60分鐘活動力為Ⅲ級以上的精子>0.80:**后120分鐘內(nèi)活動力為Ⅲ級以上的精子>0.60;**120分鐘后0.25-0.60的精子仍能活動。[臨床意義]活動不良或不活動的精子增多,是導(dǎo)致不育的重要原因之一。常見于精索靜脈曲張、泌尿生殖系的非特異性***如大腸桿菌***,某些代謝藥、抗瘧藥、雌***、氧化氮芥等,也可使精子活動力下降。六、精子計數(shù)[正常參考值](100-150)×109/L或一次排精總數(shù)為(4-6)×108。[臨床意義]1.精子計數(shù)小于20×109/L或一次排精總數(shù)少于1×108為不正常,見于精索靜脈曲張、鉛金屬等有害工業(yè)污染、大劑量放射線及某些藥物影響。2.精液多次未查到精子為無精癥,主要見于睪丸生精功能低下,先天性輸精管、精囊缺陷或輸精管阻塞。輸精管結(jié)扎術(shù)2個月后精液中應(yīng)無精子,否則說明手術(shù)失敗。3.老年人從50歲開始精子數(shù)減少以至逐步消失。廣州前向運動精子分析LIN