蛋白質(zhì)氧化修飾組學質(zhì)譜鑒定

來源: 發(fā)布時間:2022-03-08

蛋白磷酸化修飾過程:蛋白磷酸化修飾這一過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過程是可逆的,去磷酸化反應由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測方法:Western Blot檢測方法:Western Blot是檢測蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識別磷酸化蛋白的抗體來鑒定目標蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會在相應分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)。蛋白質(zhì)氧化修飾組學質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測方法:質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術之一,可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),如磷酸化、乙?;?、泛素化、SUMO化、糖基化等,大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復雜性。檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,了解它們?nèi)绾喂ぷ?、影響蛋白質(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對遺傳學和表觀遺傳學的理解。目標蛋白的PTMs研究通常需要一個富集步驟,因為修飾蛋白的豐度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測方法都是結(jié)合富集策略開發(fā)的,以比較好的識別、驗證和研究目標蛋白中PTMs的功能。深圳蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學主要方式質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法: Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳:Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳通過連接在丙烯酰胺分子上的雙核金屬(如Mn2+)配合物對磷酸基團的親和,造成磷酸化蛋白遷移的滯留,再將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,用相應蛋白的抗體識別,根據(jù)遷移滯留檢測蛋白磷酸化。技術優(yōu)勢特點:1、無放射危害。2、鑒定不受限于特異性識別蛋白質(zhì)磷酸化的抗體。3、適用于大規(guī)模磷酸化蛋白分析。4、與質(zhì)譜鑒定兼容,進行更為精細的分析鑒定。

蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾分析:組蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì),是染色質(zhì)的關鍵成分,是DNA包裝的結(jié)構(gòu)單位。組蛋白的功能受其翻譯后修飾介導。組蛋白翻譯后修飾包括通過絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化,賴氨酸或精氨酸的甲基化,賴氨酸的乙?;兔撘阴;?,賴氨酸的泛素化和磺酰化等對組蛋白進行的共價修飾。組蛋白這些修飾對于核完整性至關重要,因為它們可以調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)并募集參與基因調(diào)節(jié)、DNA修復和染色體濃縮的酶。組蛋白的翻譯后修飾大多位于N末端的尾巴上,因為N末端是蛋白質(zhì)中比較暴露和比較靈活的區(qū)域。分析組蛋白翻譯后修飾有助于探索組蛋白修飾與染色體濃縮、DNA轉(zhuǎn)錄等生物功能之間的關系。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合。

翻譯后修飾蛋白組學分析:蛋白質(zhì)組學的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達水平變化,許多至關重要的生命進程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應的改變,通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時,發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣,所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進行富集。乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。南京甲基化修飾蛋白質(zhì)組學分析價格

各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號通路和網(wǎng)絡中發(fā)揮著重要的作用。蛋白質(zhì)氧化修飾組學質(zhì)譜鑒定

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