蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過(guò)可逆的共價(jià)鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合,調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號(hào)通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生。通過(guò)實(shí)驗(yàn)的方法鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾的位點(diǎn)需要耗費(fèi)大量的資金和時(shí)間,并且酶反應(yīng)的優(yōu)化常常難以實(shí)現(xiàn)。而計(jì)算的方法則能夠快速、準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)酶特異性的底物蛋白質(zhì)及其修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能。廣州蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)有哪些類型
乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向:1、乙酰化修飾與細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控、表觀調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過(guò)程研究。2、乙酰化引起的代謝疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機(jī)理研究。乙?;飳W(xué)意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位。生物領(lǐng)域各個(gè)研究方面,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機(jī)制,生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,育種保護(hù)研究等;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機(jī)理研究等。山東琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn):能夠特異鑒定單個(gè)磷酸化位點(diǎn)。
根據(jù)不同的作用位點(diǎn),蛋白質(zhì)乙酰化修飾分為:發(fā)生在蛋白N端的乙?;揎?、發(fā)生在蛋白賴氨酸上的乙酰化修飾。前者發(fā)生在90%以上的真核生物新生蛋白上,對(duì)于新生蛋白的成熟和細(xì)胞定位非常重要,由N乙酰轉(zhuǎn)移酶(NATs)負(fù)責(zé);而后者是一個(gè)可逆的過(guò)程,主要由賴氨酸乙?;福↘ATs)和賴氨酸去乙?;福↘DACs),賴氨酸的乙?;揎検俏覀兡壳把芯康闹攸c(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化修飾應(yīng)用領(lǐng)域:應(yīng)用在食品工業(yè)方面,通過(guò)人工翻譯磷酸化修飾的蛋白可以普遍用于各種食用蛋白質(zhì)的改性,以改善蛋白質(zhì)品質(zhì)。如,花生蛋白、大豆蛋白、小麥面筋蛋白等。在人工磷酸化修飾的方法下,也可以研究各種蛋白質(zhì)的功能和相關(guān)代謝途徑的調(diào)控。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,蛋白質(zhì)的磷酸化紊亂,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控異常,因此,病理的形成與蛋白質(zhì)的磷酸化異常也有很大相關(guān)性。其分子機(jī)制問(wèn)題對(duì)于病癥等重大疾病的研究具有相當(dāng)?shù)闹笇?dǎo)意義,這也是指當(dāng)之無(wú)愧地成為生物學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。
蛋白質(zhì)乙?;揎楄b定流程:1. 組織/細(xì)胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?;贵w對(duì)乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙酰化肽段進(jìn)行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析,并對(duì)鑒定的乙酰化位點(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測(cè)。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展,我們?cè)絹?lái)越深刻地意識(shí)到,對(duì)于生物體生命活動(dòng)的管理和調(diào)控過(guò)程,密切相關(guān)的不只是單個(gè)蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài),更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動(dòng)態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí),借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動(dòng)與生物生命活動(dòng)的密切聯(lián)系。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。
蛋白磷酸化檢測(cè)方法:質(zhì)譜檢測(cè)方法優(yōu)勢(shì):1. 準(zhǔn)確度高,能夠同時(shí)檢測(cè)多個(gè)蛋白的多個(gè)磷酸化位點(diǎn)。2. 適用于大規(guī)模分析蛋白磷酸化水平。3. 不依賴于磷酸化抗體。在實(shí)際應(yīng)用中,Western Blot與質(zhì)譜分析方法各有各的好,誰(shuí)也無(wú)法完全被另一種方法所替代。所以在選擇測(cè)定磷酸化修飾的時(shí)候還應(yīng)該根據(jù)具體需要來(lái)決定。如果研究的蛋白正好有商業(yè)化的磷酸化抗體,那么lucky you,你可以選擇Western Blot進(jìn)行快速磷酸化測(cè)定研究。但是如果你所研究的蛋白質(zhì)沒(méi)有可用的商業(yè)化磷酸抗體,或是抗體價(jià)效過(guò)低,亦或是需要大規(guī)模地檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白的水平的話,質(zhì)譜檢測(cè)會(huì)是更好地選擇。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位。貴陽(yáng)丙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析
常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括乙酰化。廣州蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)有哪些類型
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過(guò)程的重要方式,幾乎在每個(gè)細(xì)胞過(guò)程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測(cè)。因此,要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行,可以對(duì)翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。廣州蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)有哪些類型