翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。蛋白質(zhì)是各種細胞功能比較重要的執(zhí)行者,其功能正常與否決定著生命活動能否有序、高效的進行,而其中翻譯后修飾起著至關(guān)重要的作用。翻譯后修飾改變了蛋白質(zhì)中不同氨基酸殘基上的生物化學官能團,進而改變其化學性質(zhì)或結(jié)構(gòu),使得蛋白質(zhì)具有更為復雜的結(jié)構(gòu)和更為完善的功能,實現(xiàn)更為精細的調(diào)節(jié)。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過程極其復雜,已知的翻譯后修飾種類有20多種。但其中較為常見的主要是磷酸化、泛素化、SUMO化、酰(含乙酰)化、甲基化以及糖基化。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,糖基化,泛素化,亞硝基化,甲基化,乙?;?,脂質(zhì)化和蛋白水解。江蘇蛋白質(zhì)甲基化修飾組學有哪些類型
泛素化修飾蛋白質(zhì)組產(chǎn)品介紹:泛素化修飾(Ubiquitylation)是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,是指一個或多個泛素分子(Ubiquitin,由76個氨基酸組成的多肽)在一系列特殊的酶作用下,將細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分類,從中選出靶蛋白分子,并對靶蛋白進行特異性修飾的過程。 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物80%~85%的蛋白質(zhì)降解。除參與蛋白質(zhì)降解之外,泛素化修飾還參與了細胞周期、增殖、細胞凋亡、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳遞、損傷修復、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控。泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,作為近年來生物化學研究的一個重大成果,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點。河南蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學分析泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。
蛋白翻譯后修飾位點鑒定:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)幾乎參與了細胞所有正常生命活動的過程,并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白質(zhì)修飾位點能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能,對于蛋白質(zhì)修飾位點的發(fā)現(xiàn)及研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。技術(shù)特點:時間快,周期短;識別位點準確,采用高分辨率質(zhì)譜技術(shù)可以準確定位到發(fā)生修飾的氨基酸位點。適用范圍:已知蛋白序列;明確翻譯后修飾的類型。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學技術(shù)原理:盡管質(zhì)譜儀器的分析能力近年來有了長足的發(fā)展,但是由于蛋白翻譯后修飾化學計量值低、復雜性大,直接將蛋白組(如全細胞裂解產(chǎn)物,組織勻漿產(chǎn)物或全血清蛋白)的酶解肽段送入質(zhì)譜鑒定和定量PTM是非常困難的。因此,很多翻譯后修飾的富集方法會被采用,來提高樣品中PTM肽段的豐度和相對比例,從而提高了質(zhì)譜對翻譯后修飾位點的鑒定效率。研究發(fā)現(xiàn)在泛素化修飾的蛋白在tyrpsin的作用下都會產(chǎn)生diGly位點?;谶@一特異性,利用針對蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTM)基序(motif)抗體,在肽段水平上免疫親和富集帶有泛素化修飾的肽段,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進行定量分析,能夠快速、準確、高通量地分析多種疾病相關(guān)信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白修飾的變化,滿足創(chuàng)新性研究、生物標志物鑒定、藥物靶點篩選和評價的需求。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學有什么重要的作用呢?
乙酰化修飾蛋白組學應用方向:1、乙?;揎椗c細胞基因表達調(diào)控、表觀調(diào)控、細胞凋亡、細胞代謝、信號轉(zhuǎn)導、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究。2、乙酰化引起的代謝疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機理研究。乙?;飳W意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細胞定位。生物領(lǐng)域各個研究方面,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機制,生長發(fā)育機制,育種保護研究等;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機理研究等。在技術(shù)上,研究翻譯后修飾蛋白的主要挑戰(zhàn)是開發(fā)特異性的檢測和純化方法。四川丙二?;揎椀鞍踪|(zhì)組學
蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學修飾過程。江蘇蛋白質(zhì)甲基化修飾組學有哪些類型
磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學:磷酸化修飾蛋白質(zhì)組的研究主要集中于真核生物中普遍存在的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化。由于體內(nèi)磷酸化蛋白的含量很低,因此在分析前必須對其進行分離和富集。目前,常用的磷酸化蛋白質(zhì)的分離和富集技術(shù)包括固定化金屬親和色譜、免疫沉淀、強陽離子交換色譜、強陰離子交換色譜、反相色譜等。這些技術(shù)被整合和優(yōu)化用于不同生物樣品的磷酸化蛋白質(zhì)組分析。翻譯后修飾分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白質(zhì)組學技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜與配備電子轉(zhuǎn)移解離(的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機聯(lián)用,對樣品進行理想的分離。譜識別可以用傳統(tǒng)的軟件進行,但是由于估計適當?shù)腻e誤發(fā)現(xiàn)率的問題,需要對結(jié)果進行過濾。江蘇蛋白質(zhì)甲基化修飾組學有哪些類型