哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)組學(xué)樣品寄樣要求：動(dòng)物組織的樣本蛋白量相對較高，送樣量的要求也相對比較寬松，一般提供50~100mg的量即可。此外，組織上有血跡、脂肪、結(jié)締組織的還需要用PBS和組織剪將其清理干凈。送樣前將樣品用液氮速凍5min，放置在-80℃保存，送樣時(shí)需要置于干冰環(huán)境中運(yùn)輸。動(dòng)物的懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是比較熱門的蛋白組學(xué)研究對象，如果想做細(xì)胞的蛋白組學(xué)，起碼需要1×107個(gè)細(xì)胞，離心后收集，置于-80攝氏度環(huán)境中。蛋白質(zhì)組學(xué)，指對某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究，以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動(dòng)的分子網(wǎng)絡(luò)。質(zhì)譜技術(shù)相較于傳統(tǒng)蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)而言，擁有靈敏、準(zhǔn)確、高通量、自動(dòng)化等特點(diǎn)。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略有什么？“自頂向下”策略并不依賴于蛋白酶的酶切，而是直接鑒定完整蛋白質(zhì)，在翻譯后修飾和蛋白質(zhì)同素異構(gòu)體鑒定方面有一些潛在的優(yōu)勢?？墒窃摬呗缘娜毕菔堑鞍踪|(zhì)在氣相中分離、電離及碎裂都十分困難。而鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)由于將蛋白質(zhì)酶解成肽段，使其在氣相中更容易被分離、電離和碎裂；所以鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中得到了比較普遍的應(yīng)用。“自中向下”策略也依賴于蛋白酶的酶切，但是由于采用了另外的酶，比如OmpT，只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg)，因此酶切之后的分子量較大，更利于后續(xù)的蛋白組裝環(huán)節(jié)。河南蛋白質(zhì)定量組學(xué)檢測價(jià)格蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。

常用的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)方法有以下幾類：非標(biāo)記（labelfree）的定量蛋白組學(xué)技術(shù)：Label free定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析，無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強(qiáng)度，從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量。TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)：這種技術(shù)采用多個(gè)（2-10）穩(wěn)定同位素標(biāo)簽，特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量，可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)：定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容，通過對基因表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的定量分析，以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達(dá)情況。近年來，隨著非凝膠技術(shù)的發(fā)展，蛋白質(zhì)組學(xué)（“Shotgun”proteomics）技術(shù)，特別是多維蛋白質(zhì)鑒定（MultidimensionalProteinIdentification，MudPIT）已成為研究復(fù)雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)和定性和定量分析的強(qiáng)有力工具。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作，也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。

定量N-糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)：蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點(diǎn)具有保守的氨基酸序列NX（S/T）（其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸）凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法。凝集素（lectin）是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì)，能專一識別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合，它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后，通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用lectin 富集 N- 糖基化肽段，然后用 N- 糖酰胺酶（PNGase）在 H218O 中切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象，如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)組學(xué)跟其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析

蛋白質(zhì)組學(xué)植物篇樣品寄樣要求：植物相較于動(dòng)物，蛋白占比不高，所以送樣在量上面的要求會(huì)多一些，推薦送500mg以上的量可以確保實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛱崛〉匠渥愕牡鞍?。如果是種仁、豆類等蛋白含量比較高的，200mg足以完成抽提。處理樣本需要用PBS將樣本表面的泥土等雜質(zhì)沖洗干凈，去除掉多余的組織。盡量能夠保證樣本的形態(tài)和純度，不推薦用錫紙包裹，放在EP管中使其形態(tài)完整為比較好。用液氮急速冷凍5min后置于-80℃環(huán)境中保存，送樣時(shí)需要添加干冰。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析