牛血清知識(shí)大分享其實(shí)提到血清很多人都對(duì)他一知半解，聽(tīng)起來(lái)很熟悉，但是了解不深入。其實(shí)血清主要功能是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，保護(hù)細(xì)胞，提供各種生長(zhǎng)因子，所以對(duì)于人體的健康，血清也是不可或缺的一部分。用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等，如造血干細(xì)胞分化培養(yǎng)，馬血清是必加成分之一。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因主要是來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。上海進(jìn)口胎牛血清供應(yīng)
細(xì)胞增殖間期
S期DNA合成期
從G1末期到S初期、細(xì)胞內(nèi)迅速形成DNA聚合酶及四種脫氧核苷酸。S期主要特點(diǎn)是利用G1期準(zhǔn)備的物質(zhì)條件完成DNA復(fù)制，并合成一定數(shù)量的組蛋白，供DNA形成染色體初級(jí)結(jié)構(gòu)。在S期末，細(xì)胞核DNA含量增加一倍，為細(xì)胞進(jìn)行分裂作了準(zhǔn)備。DNA復(fù)制一旦受到障礙或發(fā)生錯(cuò)誤，就會(huì)阻擋細(xì)胞的分裂或引起變異，導(dǎo)致異常細(xì)胞或畸形的發(fā)生。S期持續(xù)時(shí)間大約7～8小時(shí)。G2期DNA合成后期
這一時(shí)期的主要特點(diǎn)是為細(xì)胞分裂準(zhǔn)備物質(zhì)條件。DNA合成終止，但RNA和蛋白質(zhì)合成又復(fù)旺盛，主要是組蛋白、微管蛋白、膜蛋白等的合成，為紡錘體和新細(xì)胞膜等的形成備足原料。若阻斷這些合成，細(xì)胞便不能進(jìn)入有絲分裂。G2期歷時(shí)較短而恒定，哺乳動(dòng)物細(xì)胞一般為1～1.5小時(shí)。
上海雞血清公司南美特級(jí)胎牛血適合細(xì)胞株的保藏及組織***培養(yǎng)、單抗研制、絕大多數(shù)**細(xì)胞.
何謂熱滅活一般是以56℃，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和***。有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅***清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)***的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是"小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。購(gòu)買的時(shí)候注意詢問(wèn)廠家是否是已滅***清。
抗體稀釋參考
一抗稀釋范圍為1mg/mL原液1：1000-1:5000或0.2-1.0μg/mL，二抗稀釋范圍為1mg/mL原液1:2000-1:10000或10-50ng/mL
注意事項(xiàng)
為獲得比較好效果,在孵育步驟請(qǐng)使用搖床;
2. 將Tween20(終濃度0.05-0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號(hào);
3. 不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑,疊氨鈉是HRP的***物;
4. 避免手與膜直接接觸,實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)戴手套或使用干凈的鑷子;
5. 所有設(shè)備必須清潔且不沾染外來(lái)物質(zhì),金屬器械(如剪刀)不得具有可見(jiàn)的銹跡,銹跡可能導(dǎo)致斑點(diǎn)形成和高背景。 血清的種類以及方法。
有研究人員通過(guò)不同年齡段的牛血清在不同濃度下對(duì)SP2/0細(xì)胞株培養(yǎng)效果的比較試驗(yàn)，用較大增殖濃度、倍增時(shí)間、克隆率等指標(biāo)來(lái)推斷樣品血清的**年齡段，其結(jié)果如下：SP2/0細(xì)胞株為鼠骨髓瘤細(xì)胞。首先，研究人員在無(wú)菌條件下，將7個(gè)供試血清μm過(guò)濾除菌，然后將供試血清按10％、8％、6％、4％、2％的濃度分別加到MEM培養(yǎng)基稀釋好的細(xì)胞懸液中使細(xì)胞濃度為1×104／ml。充分混勻后在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔接種，每個(gè)試驗(yàn)樣接種8孔。每24h記數(shù)一孔，共記數(shù)7d。研究人員又將供試血清按8％的血清濃度加到MEM培養(yǎng)基稀釋好的細(xì)胞懸液中，將SP2／0細(xì)胞稀釋到5個(gè)／mL，分別接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔，每個(gè)供試血清樣品接種48孔。馬血清本產(chǎn)品無(wú)支原體、無(wú)噬菌體，低內(nèi)***，**終過(guò)濾孔徑0.1um。南通fbs血清產(chǎn)品
關(guān)于無(wú)血清細(xì)胞凍存液的操作規(guī)范是什么?上海進(jìn)口胎牛血清供應(yīng)
t細(xì)胞增殖試驗(yàn)又稱T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。T細(xì)胞在體外經(jīng)某種物質(zhì)刺激，細(xì)胞代謝和形態(tài)相繼變化，在24~48h細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的合成增加，產(chǎn)生一系列增殖的變化，如細(xì)胞變化、細(xì)胞漿擴(kuò)大、出現(xiàn)空泡、核仁明顯、核染色質(zhì)疏松等，由淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨湍讣?xì)胞。因此，這種淋巴細(xì)胞增殖又叫淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。據(jù)此可判斷出淋巴細(xì)胞對(duì)有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài)。  (1)非抗原性刺激物：如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陸(PWM)、脂多糖(LPS)，通稱促有絲分裂原。其中LPS刺激B細(xì)胞，PWM可刺激T和B細(xì)胞，PHA和ConA刺激T細(xì)胞增殖。  (2)抗原性刺激物：如結(jié)核菌素、葡萄球菌*、破傷風(fēng)類、鏈球菌激酶、抗原、同種異型抗原等。上海進(jìn)口胎牛血清供應(yīng)