何謂熱滅活一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和***。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅***清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會***的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是"小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅***清。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用；南京capricorn血清供應(yīng)
血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.
（4）一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清.
（5）血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會***增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認(rèn)為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清. 南京豬 血清培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用免疫電泳進(jìn)行交叉血清反應(yīng)。
血清的保存應(yīng)該注意以下幾點：
（1）需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.
（2）熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物***增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用,平滑肌細(xì)胞收縮,肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化.
避免產(chǎn)生沉淀物1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。血清能提供促接觸和伸展因子，使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷，對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用；
t細(xì)胞增殖試驗又稱T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗。T細(xì)胞在體外經(jīng)某種物質(zhì)刺激，細(xì)胞代謝和形態(tài)相繼變化，在24~48h細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的合成增加，產(chǎn)生一系列增殖的變化，如細(xì)胞變化、細(xì)胞漿擴(kuò)大、出現(xiàn)空泡、核仁明顯、核染色質(zhì)疏松等，由淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨湍讣?xì)胞。因此，這種淋巴細(xì)胞增殖又叫淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。據(jù)此可判斷出淋巴細(xì)胞對有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài)。  (1)非抗原性刺激物：如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陸(PWM)、脂多糖(LPS)，通稱促有絲分裂原。其中LPS刺激B細(xì)胞，PWM可刺激T和B細(xì)胞，PHA和ConA刺激T細(xì)胞增殖。  (2)抗原性刺激物：如結(jié)核菌素、葡萄球菌*、破傷風(fēng)類、鏈球菌激酶、抗原、同種異型抗原等。能夠維持培養(yǎng)基的pH 值，起酸堿緩沖液作用；上海capricorn血清培養(yǎng)細(xì)胞
·適合細(xì)胞類群多，包括原代細(xì)胞和干細(xì)胞；南京capricorn血清供應(yīng)
抗體稀釋參考
一抗稀釋范圍為1mg/mL原液1：1000-1:5000或0.2-1.0μg/mL，二抗稀釋范圍為1mg/mL原液1:2000-1:10000或10-50ng/mL
注意事項 1.使用該產(chǎn)品比使用沉淀比色HRP底物檢測所需的抗體濃度低。為優(yōu)化抗體濃度,請進(jìn)行一次系統(tǒng)的點印跡分析;
2. 工作液在室溫下8小時內(nèi)可以保持穩(wěn)定,但是應(yīng)該避免暴露在陽光下或任何其他強(qiáng)光環(huán)境,然而短期實驗室照明強(qiáng)度不會破壞工作液的穩(wěn)定性;
3. 封閉試劑有可能與抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng),導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性信號。封閉緩沖液同時也會影響系統(tǒng)的靈敏性,當(dāng)從一種底物轉(zhuǎn)換為另一種底物時,有時會出現(xiàn)信號衰減或背景增加的現(xiàn)象,原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測系統(tǒng);
4. 使用親和素/生物素檢測系統(tǒng)時,避免使用牛奶作為封閉試劑,因為牛奶中含有不定量的內(nèi)源性生物素,會導(dǎo)致高背景信號;
5. 保證洗滌緩沖液、封閉緩沖液、抗體溶液和底物工作液的使用體積,以確保在整個實驗過程中印跡膜完全被液體覆蓋,避免膜變干。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的信號;
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