轉(zhuǎn)染試劑是哪些物質(zhì)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-05-21

圖3. 用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡(jiǎn)單地混合,并進(jìn)行孵育(30min)、稀釋、及注射即可。



高效、靶向敲低

在實(shí)驗(yàn)靶標(biāo)中可觀(guān)察到高達(dá)85%的敲低效果



圖4. 使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實(shí)現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的復(fù)合物,以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進(jìn)行注射,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達(dá)85%的敲低(使用TaqMan分析對(duì)敲低進(jìn)行評(píng)估)。 從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。轉(zhuǎn)染試劑是哪些物質(zhì)

對(duì) HepG2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較

右圖:使用以上轉(zhuǎn)染試劑將 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟轉(zhuǎn)染到 HepG2 細(xì)胞(在膠原預(yù)處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng))。在轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)之后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè) GFP 陽(yáng)性細(xì)胞(%)和熒光強(qiáng)度。

左圖:血清和***存在的條件下能提高 LipoD293 試劑(升級(jí)版)對(duì)在 HepG2 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)三種不同的條件下轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)胞(生長(zhǎng)在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無(wú)血清和***,10% 血清和***的存在,轉(zhuǎn)染 5 小時(shí)后換液和不換液。

上海pei液體轉(zhuǎn)染試劑riboFECT CP轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)用案例,可轉(zhuǎn)染各種細(xì)胞,***靠譜!

圖7.對(duì)注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進(jìn)行血液化學(xué)分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復(fù)合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內(nèi)。在注射后2、24及48小時(shí)收集血液樣品,并通過(guò)臨床化學(xué)檢測(cè)方法對(duì)數(shù)個(gè)生物標(biāo)志物(Antech)進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明在使用Invivofectamine3.0試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染的每個(gè)個(gè)體間所檢測(cè)的生物標(biāo)志物的水平與未注射該試劑的個(gè)體相比并沒(méi)有***差異。除了以上兩種于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑,還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000,Lipofectamine?3000和Neon?轉(zhuǎn)染系統(tǒng)也可以用于siRNA轉(zhuǎn)染

用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,左圖轉(zhuǎn)染GFP cDNA,右圖共轉(zhuǎn)染GFP CDNA和GFP靶向siRNA。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。

4適用于神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染圖4.  用LipoFectMax? 和LipoFectamine®2000分別對(duì)小鼠神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),轉(zhuǎn)染24小時(shí)后觀(guān)察轉(zhuǎn)染效果,LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。

LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程

細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax? ,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,通過(guò)計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性。 并更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細(xì)胞,用PBS洗滌3次以上,以備RNA抽提。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源基因如DNA,RNA等導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制細(xì)胞基因功能、實(shí)現(xiàn)基因調(diào)控的常規(guī)工具。市場(chǎng)上各種轉(zhuǎn)染試劑琳瑯滿(mǎn)目,各有千秋,然而沒(méi)有任何一種轉(zhuǎn)染試劑可以能夠適用于所有細(xì)胞種類(lèi)、滿(mǎn)足所有實(shí)驗(yàn)需求和目的,成分控認(rèn)為轉(zhuǎn)染試劑的成分及作用機(jī)理對(duì)轉(zhuǎn)染效果及細(xì)胞生理作用影響***,是轉(zhuǎn)染試劑選擇的重要依據(jù),選試劑時(shí)要留意成分哦。嚴(yán)格來(lái)講,轉(zhuǎn)染的方法可以基于化學(xué)法、物理法(電穿孔、顯微注射等)以及***介導(dǎo)法,沒(méi)有一種方法是放之四海而皆準(zhǔn)。作為成分控的小編,本次主要為大家介紹基于各類(lèi)轉(zhuǎn)染試劑的化學(xué)法轉(zhuǎn)染。所見(jiàn)即所得——分享兩款超好用的轉(zhuǎn)染試劑,拯救你的細(xì)胞.北京轉(zhuǎn)染試劑比較 rna

連續(xù)細(xì)胞系具有無(wú)限增殖的潛能,通常要比原代或有限細(xì)胞更易處理。轉(zhuǎn)染試劑是哪些物質(zhì)

簡(jiǎn)介:X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無(wú)動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類(lèi)真核細(xì)胞(包括昆蟲(chóng)細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢(shì):

1.簡(jiǎn)單易用的多組分混合試劑,無(wú)動(dòng)物源性成分,室溫穩(wěn)定。

2.高轉(zhuǎn)染效率,對(duì)于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。

3.使用細(xì)胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好。

圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過(guò)X-tremeGENE HP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高于X-tremeGENE HP,導(dǎo)致存活細(xì)胞量減少(圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò))。 轉(zhuǎn)染試劑是哪些物質(zhì)