紅細胞裂解液產(chǎn)品說明:紅細胞裂解液,為10X紅細胞裂解液,經(jīng)過優(yōu)化配方,用于從人或鼠等的血液或標本中裂解并去除無細胞核紅細胞的溶液。此溶液中主要有效成分為氯化銨。使在裂解紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞或其它有細胞核的細胞。本裂解液經(jīng)過無菌過濾,處理過的血液或細胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。注意事項:對于微量或少量的血液樣品,可以在一步中不進行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細胞裂解液,并在冰上裂解4-5分鐘。對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。后續(xù)步驟相同。細胞凍存主要步驟有哪些.吉林懸浮細胞凍存液價格
冷凍保護劑甘油或二甲基亞砜(DMSO)分子量小、溶解度大、細胞膜通透性好,可以使冰點下降,提高細胞膜對水的通透性,且對細胞無明顯毒性。DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞,降低冰點、延緩凍存過程,同時提高細胞膜通透性,提高細胞內(nèi)離子濃度,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少細胞損傷達到保護細胞的目的。
諾為生物所提供的STEMCELL Technologies cGMP級別、無血清的細胞凍存液可使長期儲存的細胞保持高存活率,可應用于臨床細胞和特殊珍貴細胞的凍存。 江蘇通用型無血清細胞凍存液比例注意事項采取逐級降溫保存:4℃放置20min,-20℃放置30min,-70℃?過夜,***置于液氮罐中長期存儲。
2.自體血漿制備:(1)取上半部分2/3的血漿層,放入50ml離心管中,56℃,滅活30min(2)取出離心管,放入-20℃靜置10min(3)取出離心管,4℃,1100g,離心15min(4)取出上面部分澄清血漿層,放入新50ml離心管中3.即用型凍存液配制:滅活后血漿:凍存液按照1:4比例混合,即可成即用型凍存液。(例:800微升凍存液加200微升滅***漿)4.離心后沉淀部分可使用分離液獲得高純度細胞。5.分離后得到的細胞按照上方凍存/復蘇流程進行操作。
凍存風險 在凍存中,會對生物材料造成損傷的階段往往出現(xiàn)在材料結冰的過程中,那么伴隨著這樣一個結冰的過程,往往會產(chǎn)生以下的風險。
1. 溶液的影響
當冰晶在凍結的水中形成的時候,溶液中的溶質(zhì)便會析出,液體中會形成很高的溶解物濃度,從而會導致生物材料所處的環(huán)境的滲透壓升高,對生物材料造成不可逆的損傷。
2. 細胞外的冰晶形成
當生物材料的凍存時間過長時,生物液(水)會從生物材料中遷移出來,并在細胞外形成冰晶,而這樣的冰晶對脆弱的細胞膜來說無疑是“致命威脅”。 細胞凍存液的配制方法是什么?
細胞復蘇佩戴眼鏡和手套,從液氮中取出凍存的細胞管。迅速放入38℃水浴中,并不時搖動,在1分鐘內(nèi)使其完全融化,然后在無菌條件下取出細胞。1200rpm/min離心5-10min,棄去上清,加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中,次日更換一次培養(yǎng)液。細胞凍存和復蘇操作步驟:細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則,慢速冷凍可使細胞內(nèi)的水份滲出細胞外,減少細胞內(nèi)形成冰晶的機會,快融以保證細胞外結晶快速融化,避免慢速融化水份滲入細胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細胞的損傷。細胞凍存液每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是必不可少的實驗操作。通用型無血清細胞凍存液配制步驟
無血清細胞凍存液好嗎?吉林懸浮細胞凍存液價格
細胞冷凍的原理:細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結晶對細胞造成損傷。吉林懸浮細胞凍存液價格