、***濃度的確定需要做一個(gè)時(shí)間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個(gè)實(shí)驗(yàn)組改成各個(gè)作用時(shí)間就可以了。至于說***濃度的確定，網(wǎng)上有很多確認(rèn)方法，個(gè)人建議以IC50值作為***濃度即可。計(jì)算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。
MTT作用之后，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內(nèi)的紫色結(jié)晶吸走。有條件的實(shí)驗(yàn)室，這一步可以采用離心機(jī)將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機(jī)，可以在測(cè)量吸光度的時(shí)候，將酶聯(lián)免疫的機(jī)器震蕩時(shí)間調(diào)制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 cck8試劑盒價(jià)格是多少?天津cck8英文說明書
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及分享：
CCK8的說明書大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過的比較好數(shù)值。但無論如何，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件。你就算再懶，這個(gè)懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提， 如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。
摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間；3、加藥后的孵育時(shí)間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間?？雌饋砗芏?，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn)。而且都是種的空白板，也就是不加***，只加細(xì)胞和CCK8。 浙江cck8檢測(cè)細(xì)胞增殖原理CCK8系列簡(jiǎn)稱終于來了.
CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的方法：
1.將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。
2.根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)快慢決定鋪板細(xì)胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well），每組3-5重復(fù)，每孔100-200μl培養(yǎng)基。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量（如需要檢測(cè)5天，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well，5復(fù)孔，200μl培養(yǎng)基，檢測(cè)5天為例，各實(shí)驗(yàn)組需要細(xì)胞數(shù)量為1000×5×5個(gè)細(xì)胞，從計(jì)數(shù)好的細(xì)胞懸液中取出所需的細(xì)胞量和完全培養(yǎng)基混勻，**終體積為200×5×5μl。
7、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。活力計(jì)算：保存條件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞.
CCK-8沒有具體規(guī)定反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短，以具體反映比較好顯色的時(shí)間為主。因?yàn)椴煌募?xì)胞反應(yīng)時(shí)間、顯色標(biāo)準(zhǔn)都不一樣，所以一定要設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)。預(yù)實(shí)驗(yàn)中，可以先做幾個(gè)孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時(shí)間。3、懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后，可每隔一小時(shí)觀測(cè)一下顏色的變化情況，或者之間用酶標(biāo)儀檢測(cè)更為準(zhǔn)確。4、CCK8作用時(shí)間越長(zhǎng)，OD值就越大，所以對(duì)于作用時(shí)間也不是越長(zhǎng)久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測(cè)孔內(nèi)不能有氣泡。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值.北京cck8 日本同仁
加入CCK8那會(huì)空白對(duì)照組的細(xì)胞剛好長(zhǎng)滿嗎？天津cck8英文說明書
再此，給大家分享個(gè)小事情，有次，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)已經(jīng)到，但是盒子不夠，我們就用了某天的CCK-8試劑盒，***出來的結(jié)果如圖3。這個(gè)結(jié)果是我所不能接受的。后來用Sigma的再重復(fù)了一次，如圖4，這種有深有淺的才是該有的結(jié)果。我想說的是在有能力選擇范圍內(nèi)，盡量選擇好一點(diǎn)的試劑，免得浪費(fèi)時(shí)間。后來博士換了導(dǎo)師，換了課題，沒有再用Sigma的了，用了一個(gè)日本的牌子，名字和貨號(hào)如下，結(jié)果只能說justsoso，肯定沒有Sigma的好用。二次天津cck8英文說明書