在做一些***毒性試驗(yàn)時(shí)，比如做鐵死亡途徑時(shí)，我們加入一個(gè)***叫C1，這個(gè)時(shí)候就需要提前換液，其實(shí)我們?cè)囘^(guò)，還是會(huì)有一些影響。所以這時(shí)我們用中性紅檢測(cè)。我們實(shí)驗(yàn)室，通常會(huì)用20%的硫酸銅溶液放到細(xì)胞孵箱下層，預(yù)防******。理應(yīng)說(shuō)，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子，是不會(huì)揮發(fā)的。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8，結(jié)果總是不好，我也不知道是什么原因。之前在我們實(shí)驗(yàn)室有發(fā)生過(guò)這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結(jié)果。我想說(shuō)的是在有能力選擇范圍內(nèi)，盡量選擇好一點(diǎn)的試劑，免得浪費(fèi)時(shí)間。將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。湖北cck8步驟
培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可，可見(jiàn)空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外，血清不影響測(cè)定，所以我用CCK-8來(lái)測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn)，說(shuō)實(shí)話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。湖北cck8 注意事項(xiàng)CCK8原理、優(yōu)勢(shì)和步驟.
細(xì)菌***對(duì)CCK8檢測(cè)的影響：我們做***的，經(jīng)常會(huì)做到細(xì)菌或***對(duì)細(xì)胞的影響。那這種情況下我們應(yīng)該怎么辦。其實(shí)細(xì)菌防御系統(tǒng)還是非常強(qiáng)大，單獨(dú)和CCK-8在一起孵育時(shí)，不會(huì)發(fā)生還原反應(yīng)，幾乎不會(huì)和細(xì)菌發(fā)生顯色反應(yīng)。而細(xì)菌不需要入胞繁殖，所以結(jié)果還是可信的。**討厭的就是***，我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的，而且需要借助細(xì)胞的東西來(lái)進(jìn)行繁殖。繁殖過(guò)程中就需要消耗宿主的能量，會(huì)產(chǎn)生氧化還原反應(yīng)，所以我用CCK-8來(lái)測(cè)定***對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)***復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn)，說(shuō)實(shí)話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1.先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定O.D值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，O.D值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間)。細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-CCK-8 法.
CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。在CCK-8試劑盒中，**主要的化學(xué)藥品是WST-8.天津cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)處理
細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上。湖北cck8步驟
二、優(yōu)點(diǎn)：·使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；·CCK-8法能快速檢測(cè)；·CCK-8法的檢測(cè)靈敏度很高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；·CCK-8法的重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT法，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來(lái)的誤差；·CCK-8法對(duì)細(xì)胞毒性小，可以多次測(cè)定選取比較好測(cè)定時(shí)間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開(kāi)即用。湖北cck8步驟