北京cck8 原理

注意事項(xiàng)1、細(xì)胞密度：MTT要檢測(cè)的只是細(xì)胞的增殖能力，所以不用保證孔內(nèi)細(xì)胞鋪板一定要均勻，只要保證孔與孔之間的細(xì)胞數(shù)量大致相同就可，也因此細(xì)胞重懸很重要。每孔加入之前，都需要吹打混勻細(xì)胞，但即便如此也很難保證每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)量大致一致。所以我們?cè)O(shè)置了6組實(shí)驗(yàn)組，以便計(jì)算結(jié)果時(shí)可以有所取舍。2、對(duì)于MTT而言，預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。預(yù)實(shí)驗(yàn)要摸清楚兩點(diǎn)：a)細(xì)胞該如何稀釋；b)***濃度。網(wǎng)上很多人建議將細(xì)胞數(shù)稀釋到某個(gè)數(shù)值才是**合適的，但我認(rèn)為只要保證每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)在70%左右，且各個(gè)孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量大致相同就可，不需要強(qiáng)求一定要達(dá)到某個(gè)數(shù)值，現(xiàn)實(shí)中，這一步需要多次摸索。那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以。北京cck8 原理

一直都像個(gè)新手，從未老道過(guò)。所有新手的迷茫與無(wú)奈我**能體會(huì)。看到園子里有一些同學(xué)在問(wèn)有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情，當(dāng)初我也和他們一樣，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語(yǔ)。希望我寫的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒(méi)有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見仁智者見智，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰。湖北cck8 空白組 1640CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)原理.

CCK-8（CellCountingKit-8）細(xì)胞活性和增殖檢測(cè)是醫(yī)學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其原理是該試劑中含有WST-8，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。以下是CCK-8檢測(cè)的具體步驟：細(xì)胞活性檢測(cè)1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下)。

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外，血清不影響測(cè)定。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí)，多加了這個(gè)***劑的濃度，酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾；

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專注于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究，中藥功能及機(jī)理研究，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK8系列簡(jiǎn)稱終于來(lái)了.湖北cck8每次數(shù)據(jù)都不一樣

請(qǐng)問(wèn)合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?北京cck8 原理

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：·若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。·如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。北京cck8 原理