CCK8原理、優(yōu)勢和步驟 檢測原理：
◆ Cell Counting Kit簡稱CCK試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
◆ WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量。 CCK-8試劑中含有WST–8.江蘇cck8增殖數(shù)據(jù)分析
培養(yǎng)板對CCK8測定的影響：不同公司的培養(yǎng)板，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過處理對讀數(shù)都有一定的影響。所以前后實驗要一致。另外在培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā)，從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣，增加誤差。如果有可能，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O。另外，注意CCK-8不要貼在板壁上。一定要注意是否是***有問題。解決的方案就是可以在測定CCK-8的讀數(shù)前，換個細胞液，再測定。這樣會有一定的影響，但是影響的是所有的，所以均一性還算比較好。上海cck8軟件CCK8試驗的總體實驗心得.
經(jīng)驗總結(jié)及分享：
CCK8的說明書大家一定要認真閱讀，里面很多細節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細胞的種板數(shù)都很有參考價值，因為那是反復(fù)驗證過的比較好數(shù)值。但無論如何，做這個試驗一定要摸條件。你就算再懶，這個懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細胞毒性試驗為前提， 如果你做的是促進細胞生長的***的藥效實驗?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。
摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細胞的貼壁生長時間；3、加藥后的孵育時間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細胞孵育時間?？雌饋砗芏?，其實這就是一個實驗。而且都是種的空白板，也就是不加***，只加細胞和CCK8。
貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了，細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。5、cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大。總之原則就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。若細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.
cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。再說一下關(guān)于種板設(shè)置問題。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應(yīng)都是不用來做實驗的。一般每組樣品我會設(shè)置6個復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值。我用的是排***，會省很多力氣，但是也會增大組內(nèi)誤差。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了。能力有限，表達不清的大家湊合著看看吧。有疑問的歡迎大家留言討論，我們的目標(biāo)是共同進步酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；北京cck8中國
MTT與CCK8比色法的實驗細節(jié)和注意事項.江蘇cck8增殖數(shù)據(jù)分析
特點不同1、CellCountingKit-8：靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好；操作簡便，省時省力；水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞；無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低；適合于高通量***篩選。2、MTT法：特點是靈敏度高、經(jīng)濟。三、應(yīng)用不同1、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選、細胞毒性試驗以及**放射敏感性測定等。江蘇cck8增殖數(shù)據(jù)分析