細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè)。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).浙江cck8測(cè)的是什么
CKK-8原理
CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開(kāi)發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測(cè)，原理與WST-1類(lèi)似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線(xiàn)粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。
上海cck8結(jié)果怎么分析MTT與CCK8區(qū)別是什么?
CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。6、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
cck8試劑加入后孵育時(shí)間，隨著時(shí)間的增加，OD值就會(huì)增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。
再說(shuō)一下關(guān)于種板設(shè)置問(wèn)題。眾所周知周?chē)蝗滓驗(yàn)檫吘壭?yīng)都是不用來(lái)做實(shí)驗(yàn)的。一般每組樣品我會(huì)設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值。我用的是排***，會(huì)省很多力氣，但是也會(huì)增大組內(nèi)誤差。這個(gè)只有通過(guò)校正移液***和選用**適***頭了。
能力有限，表達(dá)不清的大家湊合著看看吧。有疑問(wèn)的歡迎大家留言討論，我們的目標(biāo)是共同進(jìn)步，哈哈。 細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上。
酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾；◆細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測(cè)定時(shí)間。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5%CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。6、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。上海cck8 數(shù)據(jù)分析
培養(yǎng)板周?chē)蝗着囵B(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周?chē)乃倪吤靠字患优囵B(yǎng)基。浙江cck8測(cè)的是什么
細(xì)胞活性檢測(cè)1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù))。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。5.如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值，打算以后測(cè)定的話(huà)，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1.在96孔板中配制100ml的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在37℃，5%CO2的條件下)。浙江cck8測(cè)的是什么