(一)細(xì)胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細(xì)胞凍存液,4℃預(yù)冷(新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱);取對數(shù)生長期的細(xì)胞,用細(xì)胞消化酶將單層生長的細(xì)胞消化下來;懸浮細(xì)胞則直接將細(xì)胞收集到離心管中;離心1200rpm,6min;去除上清液,逐漸加入適量預(yù)冷的細(xì)胞凍存液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml;將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5ml;在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名;凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;到達(dá)-80℃時,則可迅速放入液氮中。細(xì)胞凍存液的原理是什么?上海新型細(xì)胞凍存液保質(zhì)期多久
細(xì)胞冷凍的原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。江蘇通用細(xì)胞凍存液配比產(chǎn)品特色:即用型細(xì)胞凍存液.
血清這種富含營養(yǎng)成分的物質(zhì),可以直接支持細(xì)胞。CellApplications公司的副總裁DanielSchroen曾說道“當(dāng)細(xì)胞處于這種營養(yǎng)豐富的環(huán)境時,它們能夠更好地復(fù)蘇”。其中,白蛋白是一種關(guān)鍵的組分,可在細(xì)胞周圍形成保護(hù)性的涂層。當(dāng)細(xì)胞開始解凍時,血清也可以與釋放的***相結(jié)合。DMSO作用是取代細(xì)胞中的一些水,以防止冰晶形成,刺穿細(xì)胞。據(jù)賽默飛世爾科技的***科學(xué)家RhondaNewman介紹,DMSO還能防止細(xì)胞在冷凍期間發(fā)生收縮,而后在解凍時又變得腫脹。
運輸細(xì)胞類型:包括多能干細(xì)胞、造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞、以及間充質(zhì)干細(xì)胞等所有類型的細(xì)胞和組織用于短期儲存和/或在2-8℃下進(jìn)行運輸(而非低溫凍存)產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號Cryostor®CS10細(xì)胞凍存液100mL079305×16mL07931CryoStor®CS2細(xì)胞凍存液100mL07932CryoStor®CS5細(xì)胞凍存液100mL07933HypoThermosol®FRS保存液16×10mL07934100mL07935500mL07936BloodStor®100細(xì)胞凍存液5×100mL07938100mL07939BloodStor®55-5細(xì)胞凍存液16×7.2mL07937成份明確、無血清的冷凍保存液,已經(jīng)過優(yōu)化用于凍存在STEMCELL培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。
上海儒安生物科技有限公司抗體去除液產(chǎn)品簡介:蛋白印跡膜再生液,用于Westernblot中轉(zhuǎn)移了蛋白后膜的重復(fù)利用。在Westernblot中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后,有時還需要檢測Actin、Tubulin等表達(dá)量相對穩(wěn)定的蛋白作為參照,或檢測其它蛋白進(jìn)行比較。通過使用蛋白印跡膜再生液中特殊成份解離一抗二抗與印跡膜上抗原的結(jié)合從而去除一抗二抗,即可非常方便地重新利用同一張膜檢測其它蛋白。與重新跑一個SDS-PAGE膠比較,不但省時省力,而且可以消除重新上樣而帶來的誤差,使可比性更強(qiáng)。不含有常用的beta-巰基乙醇,無毒無味無害,室溫下使用,可對同一膜進(jìn)行5次以上的WesternBlot檢測.較快15-30鐘就可以完成全過程。使用說明:1.用TBS-T將膜洗10分鐘×3次,將膜充分浸泡于適當(dāng)體積再生液中,室溫孵育15-30分鐘,并不時搖晃,洗脫某些抗體時需要較長的時間30-60min。2.用鑷子取出膜,用TBS-T洗滌緩沖液快速淋洗膜一次,然后洗膜5min。3.此時膜上結(jié)合的抗體己被去處,用脫脂奶粉或BSA封閉,進(jìn)行下一輪抗體孵育。細(xì)胞凍存液配制比例是?上海新型細(xì)胞凍存液保質(zhì)期多久
細(xì)胞凍存液取對數(shù)成長期的體細(xì)胞,除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS清理.上海新型細(xì)胞凍存液保質(zhì)期多久
細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費,而且細(xì)胞一旦離開***開始原代培養(yǎng),它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲存在液氮中,溫度達(dá)-196℃,理論上儲存時間是無限的。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。上海新型細(xì)胞凍存液保質(zhì)期多久