簡介:X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類真核細(xì)胞(包括昆蟲細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢:1.簡單易用的多組分混合試劑,無動物源性成分,室溫穩(wěn)定。2.高轉(zhuǎn)染效率,對于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細(xì)胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高于X-tremeGENEHP,導(dǎo)致存活細(xì)胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò))。將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑推薦
原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖,因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細(xì)胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命(即它們是有限細(xì)胞系),且隨著傳代的進(jìn)行,具有比較高的生長能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑無論有無血清、***存在均可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率。
對CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較右圖:使用以上轉(zhuǎn)染試劑將編碼熒光素酶蛋白的cDNA(phRL-CMV)和綠色熒光蛋白GFP的cDNA按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟分別轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染24小時后,熒光素酶的活性使用Beckman公司的化學(xué)發(fā)光監(jiān)測器測定;GFP陽性細(xì)胞率使用BD公司的FACS檢測。左圖:LipoD293試劑(升級版)和Lipofecatmine2000(L2K),TransIT以及Fugene6的價格比較(美元/1000微升)。所有的價格是從生產(chǎn)制造商的網(wǎng)站上收集對CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較右圖:使用以上轉(zhuǎn)染試劑將編碼熒
超級好用的siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑——HiPerFect高效沉默低脫靶:HiPerFect是小RNA轉(zhuǎn)染試劑,這種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子可以在siRNA低至100pM濃度的條件下轉(zhuǎn)染(推薦濃度是1nM-5nM)。保持高效基因沉默的同時降低脫靶效應(yīng),正是這一產(chǎn)品的精髓所在。除了siRNA,HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和***劑的轉(zhuǎn)染,滿足miRNA功能分析的需要。操作簡單,方便快速:HiperFect轉(zhuǎn)染試劑的方便程度也是***的,甚至***之內(nèi)可以完成再次接種、轉(zhuǎn)染到檢測結(jié)果!這對于高通量反應(yīng)簡直是求之不得的福音:轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)基可以是含有***和血清的,在37度培養(yǎng)箱中保溫。并更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細(xì)胞,用PBS洗滌3次以上,以備RNA抽提。
用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,左圖轉(zhuǎn)染GFPcDNA,右圖共轉(zhuǎn)染GFPCDNA和GFP靶向siRNA。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。4適用于神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果,LipoFectMax?轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,通過計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性.轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型可簡單分為兩大類,連續(xù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞.上海原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑配方
CycloFect轉(zhuǎn)染試劑,你了解多少?質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑推薦
將膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(3105)接種至6孔板中,然后使用riboFECTCP轉(zhuǎn)染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測siRNA***效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達(dá)水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達(dá)水平分別為53.21%、47.46%和46.31%。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以產(chǎn)生轉(zhuǎn)染混合物。然后將混合物加入DMEM(siRNA濃度:50nM)中,與原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)48h。RT-PCR和westernblot分析檢測轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TREM-1siRNA后******了OGD誘導(dǎo)的TREM-1、p-SYK、SYK、CARD9、p-p65和NLRP3的上調(diào)。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑推薦
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