陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑作用

來源: 發(fā)布時間:2022-10-27

十全十美難,十全九美卻可以通過選擇一款好的轉(zhuǎn)染試劑來實現(xiàn)。理想的轉(zhuǎn)染試劑包括要具有較高的轉(zhuǎn)染效率,細胞毒性低,操作簡單可重復(fù),價格還要可愛?,F(xiàn)在大多數(shù)實驗室用的是脂質(zhì)體系列轉(zhuǎn)染試劑,但脂質(zhì)體對細胞毒性大,某些細胞的轉(zhuǎn)染效率還很低,看單孔的價格也很不美好。尤其是在轉(zhuǎn)染RNA方面,脂質(zhì)體的劣勢較明顯。QIAGEN在轉(zhuǎn)染試劑領(lǐng)域的研發(fā)思路與其核酸純化領(lǐng)域的精而專,全而深不同。在轉(zhuǎn)染試劑的研發(fā)過程中,另辟蹊徑,研精致思進而做到小而美的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品。從市面上眾多轉(zhuǎn)染試劑的一片紅海中,神奇的開辟出一塊藍海,為客戶烹制出了幾款高效、快速、低毒又親民的轉(zhuǎn)染試劑私房菜。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen 顯色檢測)。陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑作用

原代細胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖,因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。慢病毒轉(zhuǎn)染試劑分裝試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。

在難轉(zhuǎn)染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用LipoD293?試劑(左圖)和Lipofecatmine2000(L2K,右圖)分別將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細胞。轉(zhuǎn)染24小時后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉(zhuǎn)染效率。對難轉(zhuǎn)染細胞LNCap細胞轉(zhuǎn)染效率的比較在難轉(zhuǎn)染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所(RoswellCancerInstitute)

用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡單地混合,并進行孵育(30min)、稀釋、及注射即可。靶向敲低在實驗靶標中可觀察到高達85%的敲低效果使用Invivofectamine3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine3.0試劑與靶向FactorVII(FVII)或PPIBmRNA的siRNA組成的復(fù)合物,以每千克小鼠體重1mg(mg/kg)的注射量進行注射,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達85%的敲低(使用TaqMan分析對敲低進行評估)。無論有無血清、***存在均可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率。

用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細胞中。轉(zhuǎn)染24小時后,細胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè))。對懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/30毫升的293F細胞分別使用LipoD293?試劑、293fectin、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標準轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細胞表達,用量為LipoD293?試劑,20微克,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA。細胞培養(yǎng)系列 | 專為 293T 優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑 Nano293T.陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑作用

CycloFect轉(zhuǎn)染試劑,你了解多少?陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑作用

對HepG2細胞轉(zhuǎn)染效率的比較右圖:使用以上轉(zhuǎn)染試劑將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟轉(zhuǎn)染到HepG2細胞(在膠原預(yù)處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng))。在轉(zhuǎn)染48小時之后,用流式細胞儀檢測GFP陽性細胞(%)和熒光強度。左圖:血清和***存在的條件下能提高LipoD293試劑(升級版)對在HepG2細胞的轉(zhuǎn)染效率。通過三種不同的條件下轉(zhuǎn)染HepG2細胞(生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無血清和***,10%血清和***的存在,轉(zhuǎn)染5小時后換液和不換液。陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑作用

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