上海Opti-MEM轉(zhuǎn)染試劑作用

來源: 發(fā)布時間:2023-03-17

在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞(原代大鼠動脈平滑肌細(xì)胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動脈平滑肌原代細(xì)胞并用使用LipoD293?試劑(左圖)和Lipofecatmine2000(L2K,右圖)分別將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24小時后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉(zhuǎn)染效率。對難轉(zhuǎn)染細(xì)胞LNCap細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞(原代大鼠動脈平滑肌細(xì)胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所(RoswellCancerInstitute)3.0試劑進行轉(zhuǎn)染的每個個體間所檢測的生物標(biāo)志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異。上海Opti-MEM轉(zhuǎn)染試劑作用

羅氏X-TremeGENE便是新一代轉(zhuǎn)染試劑的佼佼者,升級版的多組分混合試劑,兼具極高轉(zhuǎn)染效率和極低細(xì)胞毒性,在超過350株真核細(xì)胞株中獲得了高效轉(zhuǎn)染的驗證,尤其針對難轉(zhuǎn)染細(xì)胞株亦有出色表現(xiàn)。兩種試劑對CHO-K1細(xì)胞轉(zhuǎn)染帶GFP標(biāo)記的質(zhì)粒,A和C是轉(zhuǎn)染后熒光顯微圖,B和D是明場顯微圖.與競爭產(chǎn)品比較,X-tremeGENEHP表現(xiàn)出更優(yōu)的轉(zhuǎn)染效率更低的細(xì)胞毒性不同試劑在含血清的培養(yǎng)基中對四種很難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株進行轉(zhuǎn)染,X-tremeGENEHP試劑遠(yuǎn)優(yōu)于其他試劑超過350種細(xì)胞株的高效轉(zhuǎn)染驗證還有一個好消息X-TremeGENE轉(zhuǎn)染試劑正在進行8折促銷哦快去搶購吧~默克自2015年成為羅氏生化試劑的全球***代理,可以提供從細(xì)胞培養(yǎng)和功能分析、基因機理研究到蛋白機理研究的完整方案:國產(chǎn)轉(zhuǎn)染試劑配制RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進、高效的siRNA輸送解決方案。

原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖。因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細(xì)胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命(即它們是有限細(xì)胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。

圖7.對注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進行血液化學(xué)分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復(fù)合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內(nèi)。在注射后2、24及48小時收集血液樣品,并通過臨床化學(xué)檢測方法對數(shù)個生物標(biāo)志物(Antech)進行評估。結(jié)果表明在使用Invivofectamine3.0試劑進行轉(zhuǎn)染的每個個體間所檢測的生物標(biāo)志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異。除了以上兩種于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑,還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000,Lipofectamine?3000和Neon?轉(zhuǎn)染系統(tǒng)也可以用于siRNA轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成; 混勻后室溫下孵育15-20分鐘,直接取10μL加入已鋪好細(xì)胞的孔中.

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轉(zhuǎn)染后6h觀察細(xì)胞狀態(tài),并更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細(xì)胞,用PBS洗滌3次以上,以備RNA抽提。上海Opti-MEM轉(zhuǎn)染試劑作用

LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑具有以下幾個優(yōu)點:高轉(zhuǎn)染效率,適用于多種細(xì)胞系對細(xì)胞毒性低適用于DNA和RNA的轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染前無需去除細(xì)胞培養(yǎng)基或血清轉(zhuǎn)染后無需清洗細(xì)胞或更換培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染效率高,適用于多種細(xì)胞系圖1.LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑以綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染幾種常見細(xì)胞系,通過檢測GFP信號比較轉(zhuǎn)染效率。細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染操作,通過計算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性。上海Opti-MEM轉(zhuǎn)染試劑作用

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