抗體稀釋參考一抗稀釋范圍為1mg/mL原液1：1000-1:5000或0.2-1.0µg/mL，二抗稀釋范圍為1mg/mL原液1:2000-1:10000或10-50ng/mL注意事項(xiàng) 1.為獲得比較好效果,在孵育步驟請(qǐng)使用搖床;  2.將Tween20(終濃度0.05-0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號(hào);  3.不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑,疊氨鈉是HRP的***物;  4.避免手與膜直接接觸,實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)戴手套或使用干凈的鑷子;  5.所有設(shè)備必須清潔且不沾染外來(lái)物質(zhì),金屬器械(如剪刀)不得具有可見(jiàn)的銹跡,銹跡可能導(dǎo)致斑點(diǎn)形成和高背景。CCK-8溶液可直接加入到細(xì)胞中，不需要與其它組分預(yù)混，操作方便，檢測(cè)準(zhǔn)確。長(zhǎng)沙cck8檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡
RIPA細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品詳情：
RIPA裂解液是較可靠的緩沖液之一，其主要成分含1% NP-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS，該緩沖液能夠從細(xì)胞質(zhì)，膜和**白質(zhì)中提取蛋白質(zhì)，并且與許 多應(yīng)用相容，包括蛋白質(zhì)分析，和蛋白質(zhì)純化。RIPA緩沖液不含蛋白酶或磷酸酶，如果需要，可將酶添加到試劑中以防止蛋白質(zhì)水解并維持蛋白質(zhì) 的磷酸化狀態(tài)。一些蛋白激酶和其他酶可能對(duì)RIPA緩沖液的組分敏感，導(dǎo)致其活性降低。 在這種情況下，準(zhǔn)備不含脫氧膽酸鈉和SDS的RIPA緩沖液。
注意事項(xiàng)：
1.抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
2.裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不建議用Bradford 法測(cè)定蛋白濃度，可以選用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。
3.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，例如NFKB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。 北京成纖維細(xì)胞增殖檢測(cè)CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子。
1.產(chǎn)品簡(jiǎn)介
微管蛋白是有絲分裂器、纖毛、鞭毛和細(xì)胞骨架的組成部分，主要由2種可溶性蛋白組成，α-tubulin和β-tubulin，分子量均約為55 kDa。β-tubulin抗體可作為Western Blot中的內(nèi)參對(duì)照。但要注意的是，β-tubulin在某些細(xì)胞中的表達(dá)可能也不穩(wěn)定。例如在脂肪組織中β-tubulin的表達(dá)量非常低，因此對(duì)于這些組織就不能用β-tubulin作為內(nèi)參對(duì)照。
2.產(chǎn)品特點(diǎn)
?性價(jià)比高，多種稀釋比例推薦：
WB： 1：1000 - 1：10000
IF： 1：200 - 1：1000
IHC： 1：200 - 1：1000
?常備現(xiàn)貨
3.結(jié)果示例
β-tubulin小鼠單抗(3G7)經(jīng)1：5000(泳道1)、1：10000(泳道2)、1：20000(泳道3)
和1：40000 (泳道4)梯度稀釋，對(duì)Hela細(xì)胞裂解物進(jìn)行Western Blot分析。
β-tubulin小鼠單抗(3G7)對(duì)人宮頸*(左)和前列腺病(右)患者的扁平細(xì)胞病變進(jìn)行免疫組化染色。
Cell Counting Kit-8(cck8)細(xì)胞增值與毒性檢測(cè)試劑盒是一種基于水溶性四唑鹽的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒。它在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原為可溶性的橙黃色甲臜(formazan)。甲臜的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越快、細(xì)胞毒性越小、細(xì)胞數(shù)量越多，則顏色越深，顏色的深淺與細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。該產(chǎn)品細(xì)胞毒性小，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有影響，與MTT，XTT，MTS和WST-1相比，此法檢測(cè)靈敏度更高，線性范圍更寬，適用于***篩選，細(xì)胞增殖測(cè)定，細(xì)胞毒性測(cè)定和**藥敏實(shí)驗(yàn)。 CCK-8是非放射性的，允許敏感的比色分析來(lái)測(cè)定細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性分析中的活細(xì)胞數(shù)量。
比MTT、MTS或WST-1更敏感對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性簡(jiǎn)單步驟(無(wú)需解凍) ，操作更安全。 細(xì)胞增殖是生命的重要特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。
t細(xì)胞增殖試驗(yàn)又稱T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。T細(xì)胞在體外經(jīng)某種物質(zhì)刺激，細(xì)胞代謝和形態(tài)相繼變化，在24~48h細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的合成增加，產(chǎn)生一系列增殖的變化，如細(xì)胞變化、細(xì)胞漿擴(kuò)大、出現(xiàn)空泡、核仁明顯、核染色質(zhì)疏松等，由淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨湍讣?xì)胞。因此，這種淋巴細(xì)胞增殖又叫淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。據(jù)此可判斷出淋巴細(xì)胞對(duì)有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài)。 (1) 非抗原性刺激物：如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陸(PWM)、脂多糖(LPS)，通稱促有絲分裂原。其中LPS刺激B細(xì)胞，PWM可刺激T和B細(xì)胞，PHA和ConA刺激T細(xì)胞增殖。 (2) 抗原性刺激物：如結(jié)核菌素、葡萄球菌*、破傷風(fēng)類、鏈球菌激酶、抗原、同種異型抗原等。CCK法的檢測(cè)靈敏度很高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度.廣州tnk細(xì)胞增殖凋亡
CCK-8不能用于細(xì)胞染色。長(zhǎng)沙cck8檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡
并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。三、CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的注意事項(xiàng)當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月，在-20℃下避光可以保存1年。當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450nm的吸光度作為空白對(duì)照。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、***銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí)。長(zhǎng)沙cck8檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡
上海儒安生物科技有限公司屬于醫(yī)藥健康的高新企業(yè)，技術(shù)力量雄厚。是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，隨著市場(chǎng)的發(fā)展和生產(chǎn)的需求，與多家企業(yè)合作研究，在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn)，追求新型，在強(qiáng)化內(nèi)部管理，完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時(shí)，良好的質(zhì)量、合理的價(jià)格、完善的服務(wù)，在業(yè)界受到寬泛好評(píng)。公司擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，具有細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體等多項(xiàng)業(yè)務(wù)。上海儒安生物科技自成立以來(lái)，一直堅(jiān)持走正規(guī)化、專業(yè)化路線，得到了廣大客戶及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持。