細胞凍存的操作步驟是什么配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；離心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml；將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑.南京bi無血清細胞凍存液
脫水
當生物材料處于上述條件（2）的情況下，細胞脫水則會開放相關(guān)壓力對細胞直接傷害的“大門”。
4. 細胞內(nèi)冰晶的形成
雖然一些***或組織能夠耐受細胞外的冰晶，但是在凍存過程的中如果在細胞內(nèi)形成了任何微小冰晶時對細胞來說都是致命的。
凍存液 凍存保護劑（cryoprotectant）又或者說是凍存液是一種用來保護生物組織免受凍存?zhèn)Φ奈镔|(zhì)。其實在現(xiàn)實生活中，
自然的凍存保護劑可以在北極或者南極的昆蟲，魚類，兩棲動物等生物中找到，這樣的保護劑（抗凍復(fù)合物，抗凍蛋白）能夠在他們的身體中使寒冷冬季的嚴寒傷害降到比較低
配制好的細胞凍存液配制步驟液氮罐液氮不夠?qū)毎挠绊懨?
解凍
解凍后，應(yīng)該立即鋪板在預(yù)先包被好的培養(yǎng)皿中。
開始之前，提前準備好以下材料：試管，恢復(fù)至室溫的培養(yǎng)基，預(yù)先包被的培養(yǎng)板，確保整個解凍復(fù)蘇程序可以在**短的時間內(nèi)完成。
注意：不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基。
1. 在37°C水浴中快速解凍，持續(xù)溫和的在水中晃動凍存管，直到剩余少量細胞還處于結(jié)冰狀態(tài)。
2. 水浴中取出凍存管，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。
3. 用2 mL的血清移液管把細胞懸液轉(zhuǎn)移到一個15 mL的錐形試管。
注意：用2 mL的血清移液管代替1 mL的***頭可以減少細胞聚集體的分解。
細胞冷存液
***頭輕柔吹打混勻,Z成細胞懸液。4.將離心管中的細胞懸液分裝與細胞凍存管中，每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩(wěn)定凍存數(shù)年。6.如若長期保存，可在次日轉(zhuǎn)移至液氮中。
操作步驟:
細胞復(fù)蘇：1.從-80℃冰箱或液氮中取出凍存細胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
2.待凍存管中細胞懸液完全融化后，立即1000 rmp離心5分鐘，完全除去上清。
3.加入1mL細胞培養(yǎng)基于凍存管中，***頭輕柔吹打懸浮細胞，并轉(zhuǎn)移細胞于細胞培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)瓶中。 細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。細胞凍存液取對數(shù)成長期的體細胞，除去舊細胞培養(yǎng)液，用PBS清理.完全培養(yǎng)基和細胞凍存液需要4度預(yù)冷
在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要的。南京bi無血清細胞凍存液
細胞凍存簡介生物醫(yī)學科研實驗 1、培養(yǎng)室實驗準備工作大致同細胞傳代培養(yǎng)的前6個步驟。簡言之：用紫外消毒等消毒超凈工作臺面；清洗消毒手部；觀察細胞；預(yù)熱培養(yǎng)用液；點燃酒精燈；取出巴斯德吸管、刻度吸管等插在無菌試管內(nèi)。
凍存液的配置方法：按如下比例配置：10%甘油+90%培養(yǎng)基，或者10%DMSO+90%培養(yǎng)基。用于配制凍存液的培養(yǎng)基中小牛血清濃度適量提高至20%或更高。所用的甘油需事先高壓滅菌，如使用DMSO，則不需要任何滅菌措施。
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