培養(yǎng)板對CCK8測定的影響：不同公司的培養(yǎng)板，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過處理對讀數(shù)都有一定的影響。所以前后實驗要一致。另外在培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā)，從而能導致培養(yǎng)基的體積不一樣，增加誤差。如果有可能，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O。另外，注意CCK-8不要貼在板壁上。一定要注意是否是***有問題。解決的方案就是可以在測定CCK-8的讀數(shù)前，換個細胞液，再測定。這樣會有一定的影響，但是影響的是所有的，所以均一性還算比較好。酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；天津mts cck8
CCK-8的原理
所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低，有些細胞在***處理后，可能活細胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）？當然也有解決的辦法，下期給大家介紹。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時檢測讀數(shù)。顏色也會越深 浙江cck8結(jié)果統(tǒng)計分析細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學物品對細胞的影響上。
1、種板數(shù)：這個要查文獻，看你所用細胞別人有無做過，把范圍大致找出。記住還要參考說明書，這個很重要。然后稀釋一系列濃度種板。首先你要觀察多長時間細胞可貼壁完全，一般貼壁生長24小時。然后還有在你的實驗時間內(nèi)，不同細胞數(shù)下孔內(nèi)生長情況。比如我擬定考察4天的時間，那么在4天內(nèi)，細胞是剛好鋪滿還是堆積生長？因為每塊板都會設(shè)置對照孔，也就是含有細胞的培養(yǎng)基+CCK8，這個數(shù)值是板上的比較大數(shù)值，CCK8試驗比較好OD值在1.0附近，所以這個比較大數(shù)值比較好能控制在1.0左右。我的實驗經(jīng)驗是不要讓細胞長滿，一旦長滿了很難去判斷是否堆積生長了，對***能否順利進入細胞有影響此為其一，其二生長不均勻易導致孔間OD值數(shù)據(jù)偏差大，而且OD值也很大。
CCK-8的用途1.細胞增殖測定：細胞增殖實驗在很多領(lǐng)域都會用到，比如**相關(guān)、損傷后修復等。2.***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時，經(jīng)常會用到CCK-8。3.細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響，比如在UV、低氧或者什么化學物品對細胞的影響上。4.**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買，比如果子老師所在的團隊，哈哈哈。5.微生物對細胞的毒性或增殖的實驗用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。湖北cck8 空白組
使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑.天津mts cck8
實驗材料及試劑
96 孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等；細胞、CCK8等。
實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中，每組設(shè)置8個復孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后，用酶標儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復 3 次， 取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD] ×**，以分組為橫坐標，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長***率柱狀圖。 天津mts cck8
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