當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1000 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2500 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
注意事項(xiàng)CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月，在-20℃下避光可以保存1年。當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。 主要是重復(fù)性優(yōu)于MTT；北京cck8價(jià)格
在做一些***毒性試驗(yàn)時(shí)，比如做鐵死亡途徑時(shí)，我們加入一個(gè)***叫C1，這個(gè)時(shí)候就需要提前換液，其實(shí)我們?cè)囘^，還是會(huì)有一些影響。所以這時(shí)我們用中性紅檢測(cè)。我們實(shí)驗(yàn)室，通常會(huì)用20%的硫酸銅溶液放到細(xì)胞孵箱下層，預(yù)防******。理應(yīng)說，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子，是不會(huì)揮發(fā)的。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8，結(jié)果總是不好，我也不知道是什么原因。之前在我們實(shí)驗(yàn)室有發(fā)生過這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結(jié)果。我想說的是在有能力選擇范圍內(nèi)，盡量選擇好一點(diǎn)的試劑，免得浪費(fèi)時(shí)間。江蘇cck8 dojindo 說明書MTT與CCK8區(qū)別是什么?
、***濃度的確定需要做一個(gè)時(shí)間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個(gè)實(shí)驗(yàn)組改成各個(gè)作用時(shí)間就可以了。至于說***濃度的確定，網(wǎng)上有很多確認(rèn)方法，個(gè)人建議以IC50值作為***濃度即可。計(jì)算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。
MTT作用之后，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內(nèi)的紫色結(jié)晶吸走。有條件的實(shí)驗(yàn)室，這一步可以采用離心機(jī)將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機(jī)，可以在測(cè)量吸光度的時(shí)候，將酶聯(lián)免疫的機(jī)器震蕩時(shí)間調(diào)制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。
酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾；◆細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測(cè)定時(shí)間。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5%CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。6、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子。
摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間；3、加藥后的孵育時(shí)間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間?？雌饋砗芏?，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn)。而且都是種的空白板，也就是不加藥物，只加細(xì)胞和CCK8。我沒有做過MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）。都說CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個(gè)試劑盒。
當(dāng)然仁者見仁智者見智，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，但供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的，道路是曲折的，時(shí)間就是用來浪費(fèi)的，科研就是自娛自樂使勁折騰。
培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。江蘇cck8標(biāo)準(zhǔn)曲線
CCK8原理、優(yōu)勢(shì)和步驟.北京cck8價(jià)格
從世界范圍來看，美、歐、日等發(fā)達(dá)地區(qū)的銷售產(chǎn)業(yè)發(fā)展歷史悠久，無論是銷售產(chǎn)品制造業(yè)還是銷售服務(wù)業(yè)，都處于全球優(yōu)先地位。而泰國、印度等東南亞及南亞地區(qū)，銷售產(chǎn)業(yè)雖然起步晚，但是發(fā)展較快，已成為經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展重要組成部分。在項(xiàng)目的加入上可以進(jìn)行分?jǐn)偅恳患壹瘓F(tuán)的資本壓力都會(huì)得到較大的減輕，這種具有組合資本優(yōu)勢(shì)的生產(chǎn)型項(xiàng)目也是很多資本重點(diǎn)關(guān)注的資本項(xiàng)目。醫(yī)藥健康上下游未整體規(guī)劃，醫(yī)用物流公司十分分散，許多下游需求店鋪及用戶因物流體系不完善而放棄該種醫(yī)藥的引入和使用。由于醫(yī)用藥保存條件要求十分高，存儲(chǔ)倉庫與冷藏運(yùn)輸車等的建設(shè)與運(yùn)行成本便居高不下，使得醫(yī)藥冷鏈物流從建設(shè)到運(yùn)營中的成本都遠(yuǎn)超于傳統(tǒng)物流成本。以細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體為例，主打運(yùn)動(dòng)健康A(chǔ)PP停留在工具層面，缺少完整的消費(fèi)場(chǎng)景閉環(huán)，較強(qiáng)的工具屬性停留在實(shí)現(xiàn)用戶**基礎(chǔ)的功能需求，并未涉及足夠高的用戶使用價(jià)值實(shí)現(xiàn)，同時(shí)缺乏數(shù)字化運(yùn)營的效能也是運(yùn)動(dòng)健康A(chǔ)PP發(fā)展的明顯桎梏，經(jīng)營模式有待進(jìn)一步探索。北京cck8價(jià)格
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