細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。
MTT實(shí)驗(yàn)操作
1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：
2、在對照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí)； **藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的，我見過做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。浙江cck8實(shí)驗(yàn)
注意事項(xiàng)1、細(xì)胞密度：MTT要檢測的只是細(xì)胞的增殖能力，所以不用保證孔內(nèi)細(xì)胞鋪板一定要均勻，只要保證孔與孔之間的細(xì)胞數(shù)量大致相同就可，也因此細(xì)胞重懸很重要。每孔加入之前，都需要吹打混勻細(xì)胞，但即便如此也很難保證每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)量大致一致。所以我們設(shè)置了6組實(shí)驗(yàn)組，以便計(jì)算結(jié)果時(shí)可以有所取舍。2、對于MTT而言，預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。預(yù)實(shí)驗(yàn)要摸清楚兩點(diǎn)：a)細(xì)胞該如何稀釋；b)***濃度。網(wǎng)上很多人建議將細(xì)胞數(shù)稀釋到某個(gè)數(shù)值才是**合適的，但我認(rèn)為只要保證每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)在70%左右，且各個(gè)孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量大致相同就可，不需要強(qiáng)求一定要達(dá)到某個(gè)數(shù)值，現(xiàn)實(shí)中，這一步需要多次摸索。湖北cck8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)原理在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸，有能量代謝）.
CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會(huì)*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時(shí)間。酚紅和血清對CCK法的檢測不會(huì)造成干擾；
一直都像個(gè)新手，從未老道過。所有新手的迷茫與無奈我**能體會(huì)?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情，當(dāng)初我也和他們一樣，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語。希望我寫的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見仁智者見智，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡單的，道路是曲折的，時(shí)間就是用來浪費(fèi)的，科研就是自娛自樂使勁折騰。CCK8原理、優(yōu)勢和步驟.天津cck8
靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好.浙江cck8實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul浙江cck8實(shí)驗(yàn)