安徽高效液相色譜系統(tǒng)供應商

液相色譜類型

液相色譜按其分離機理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法

凝膠色譜法

目前，凝膠色譜法既適用于水溶液的體系，又適用于有機溶劑的體系。當所用的洗脫劑為水溶液時，稱為凝膠過濾色譜，凝膠過濾色譜在生物界的應用比較多；采用有機溶劑為洗脫劑時，稱為凝膠滲透色譜，凝膠滲透色譜在高分子領(lǐng)域應用比較多。

四種不同類型的液相色譜，可以依據(jù)樣品性質(zhì)的不同，選擇不同的方法，靈活應用。

高效液相色譜分離原理

液-液分配

(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間應互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個明顯的分界面。當試樣進入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進行分配。達到平衡時，服從于高效液相色譜計算公式：

式中，cs—溶質(zhì)在固定相中濃度；cm—溶質(zhì)在流動相中的濃度； Vs—固定相的體積；Vm—流動相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動相對K影響不大，LLPC流動相對K影響較大。

a.正相液-液分配色譜法(Normal Phase liquid Chromatography): 流動相的極性小于固定液的極性。

b.反相液-液分配色譜法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流動相的極性大于固定液的極性。

c.液-液分配色譜法的缺點：盡管流動相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動相中仍有微量溶解；流動相通過色譜柱時的機械沖擊力，會造成固定液流失。上世紀70年代末發(fā)展的化學鍵合固定相（見后），可克服上述缺點。

什么是液相色譜？

液相色譜是一類分離與分析技術(shù)，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過程中．為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

經(jīng)典液相色譜的流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分離后的樣品是被分級收集后再進行分析的，使得經(jīng)典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復雜。直到20世紀60年代．發(fā)展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高壓輸液泵和自動記錄的檢測器，克服了經(jīng)典液相色譜的缺點，發(fā)展成高效液相色譜，也稱為高壓液相色譜。

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液相色譜類型

液相色譜按其分離機理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法

分配色譜法

這種色譜的流動相和固定相都是液體，樣品分子在兩個液相之間很快達到平衡分配，利用各組分在兩相中分配系數(shù)的差異進行分離，類似于萃取過程。

一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400～4000)、三甲撐乙二醇(TMG)和角鯊烷(SQ)。采用與氣相色譜(GC)同樣的方法，將固定液涂漬在多孔的載體表面，但在使用中固定液易流失。目前，應用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中，固定液不是涂在載體表面，而是通過化學反應在純硅膠顆粒表面鍵合上某種有機基團。

例如，利用氯代十八烷基硅烷與硅膠表面的羥基(-OH)之間的反應就可以形成一烷基化表面。這種固定液的優(yōu)點是不易被流動相剝蝕。在分配色譜法中，流動相可為純?nèi)軇部梢圆捎没旌先軇┻M行梯度淋洗，其極性應與固定液差別大一些，以避免兩者之間相溶。通常可分為正相分配和反相分配。

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