新疆高效液相色譜系統(tǒng)

液相色譜類型

液相色譜按其分離機(jī)理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法

分配色譜法

這種色譜的流動(dòng)相和固定相都是液體，樣品分子在兩個(gè)液相之間很快達(dá)到平衡分配，利用各組分在兩相中分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離，類似于萃取過(guò)程。

一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400～4000)、三甲撐乙二醇(TMG)和角鯊?fù)?SQ)。采用與氣相色譜(GC)同樣的方法，將固定液涂漬在多孔的載體表面，但在使用中固定液易流失。目前，應(yīng)用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中，固定液不是涂在載體表面，而是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)在純硅膠顆粒表面鍵合上某種有機(jī)基團(tuán)。

例如，利用氯代十八烷基硅烷與硅膠表面的羥基(-OH)之間的反應(yīng)就可以形成一烷基化表面。這種固定液的優(yōu)點(diǎn)是不易被流動(dòng)相剝蝕。在分配色譜法中，流動(dòng)相可為純?nèi)軇?，也可以采用混合溶劑進(jìn)行梯度淋洗，其極性應(yīng)與固定液差別大一些，以避免兩者之間相溶。通?？煞譃檎喾峙浜头聪喾峙?。

液相色譜理論

發(fā)展簡(jiǎn)況

液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)（常有幾個(gè)小時(shí)）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。

它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。

什么是液相色譜？

液相色譜是一類分離與分析技術(shù)，其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過(guò)程中．為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

經(jīng)典液相色譜的流動(dòng)相是依靠重力緩慢地流過(guò)色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分離后的樣品是被分級(jí)收集后再進(jìn)行分析的，使得經(jīng)典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復(fù)雜。直到20世紀(jì)60年代．發(fā)展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高壓輸液泵和自動(dòng)記錄的檢測(cè)器，克服了經(jīng)典液相色譜的缺點(diǎn)，發(fā)展成高效液相色譜，也稱為高壓液相色譜。

賽默飛高效液相色譜業(yè)務(wù)副總裁兼總經(jīng)理Fraser McLeod表示：“在整個(gè)生物制藥的流程中，從藥物研發(fā)到質(zhì)控的批次放行，數(shù)據(jù)完整性對(duì)于決策是必不可少的。為快速獲取可靠結(jié)果，靈敏度和通量非常關(guān)鍵。我們開(kāi)發(fā)出的這套系統(tǒng)展示出在復(fù)雜分析應(yīng)用時(shí)的**辨分離和重復(fù)性?！?

? Vanquish Flex UHPLC系統(tǒng)采用獨(dú)特設(shè)計(jì)，即便在高通量的情況下，仍可以保證分析物色譜峰擁有尖銳峰形，實(shí)現(xiàn)在較短時(shí)間內(nèi)分析更多樣品。該系統(tǒng)良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性為數(shù)據(jù)質(zhì)量提供了可靠保障，確保能夠分析大量的樣品，以供質(zhì)控分析比較。其重要特點(diǎn)如下：

? 新型四元梯度泵模塊，設(shè)計(jì)穩(wěn)健，性能良好，保證高通量的前提下依然可提供方法開(kāi)發(fā)的靈活性。

? 泵比較大耐壓 1000 bar，性能***，流速高達(dá) 8 mL/min，應(yīng)用靈活，可實(shí)現(xiàn)**辨分離。

? 新型熒光檢測(cè)器模塊靈敏度高，與高靈敏度、寬線性范圍的UV、DAD檢測(cè)器和針對(duì)非揮發(fā)性化合物的電霧式檢測(cè)器互為補(bǔ)充。

雙恒溫模式：蒸餾氣體和加壓氣體。

高效液相色譜分離原理

液-液分配

(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動(dòng)相和固定相都是液體。流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，服從于高效液相色譜計(jì)算公式：

式中，cs—溶質(zhì)在固定相中濃度；cm—溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度； Vs—固定相的體積；Vm—流動(dòng)相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動(dòng)相對(duì)K影響不大，LLPC流動(dòng)相對(duì)K影響較大。

a.正相液-液分配色譜法(Normal Phase liquid Chromatography): 流動(dòng)相的極性小于固定液的極性。

b.反相液-液分配色譜法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流動(dòng)相的極性大于固定液的極性。

c.液-液分配色譜法的缺點(diǎn)：盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動(dòng)相中仍有微量溶解；流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力，會(huì)造成固定液流失。上世紀(jì)70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相（見(jiàn)后），可克服上述缺點(diǎn)。

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液相色譜類型

液相色譜按其分離機(jī)理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法

吸附色譜法

吸附色譜法的固定相為吸附劑，色譜的分離過(guò)程是在吸附劑表面進(jìn)行的，不進(jìn)入固定相的內(nèi)部。與氣相色譜不同，流動(dòng)相(即溶劑)分子也與吸附劑表面發(fā)生吸附作用。在吸附劑表面，樣品分子與流動(dòng)相分子進(jìn)行吸附競(jìng)爭(zhēng)，因此流動(dòng)相的選擇對(duì)分離效果有很大的影響，一般可采用梯度淋洗法來(lái)提高色譜分離效率。

在聚合物的分析中，吸附色譜一般用來(lái)分離添加劑，如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等，也可用于石油烴類的組成分析。