細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費，而且細(xì)胞一旦離開***開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲存在-70...

細(xì)胞冷存液***頭輕柔吹打混勻,Z成細(xì)胞懸液。4.將離心管中的細(xì)胞懸液分裝與細(xì)胞凍存管中，每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細(xì)胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩(wěn)定凍存數(shù)年。6.如若長期保存，可在次日轉(zhuǎn)移至液氮中。操作步驟:細(xì)胞復(fù)蘇：1.從-80℃冰箱或液氮中...

細(xì)胞復(fù)蘇1.從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。2.從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻；3.離心，1000rpm，5min；4.棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液...

對 HepG2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較 右圖：使用以上轉(zhuǎn)染試劑將 GFP 的 cDNA（pEGFP-N3）按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟轉(zhuǎn)染到 HepG2 細(xì)胞（在膠原預(yù)處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)）。在轉(zhuǎn)染 48 小時之后，用流式細(xì)胞儀檢測 GFP 陽性細(xì)胞（%）和...

.在多種不同類型細(xì)胞中基因敲除效率超過90%。 高靈活應(yīng)用， 同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實驗。 細(xì)胞毒性低，結(jié)果相關(guān)性好，確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過程本身介導(dǎo)。 兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，...

基于陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進入細(xì)胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，前者細(xì)胞毒性相對較大，后者細(xì)胞毒性較小，但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)...

凍存風(fēng)險在凍存中，會對生物材料造成損傷的階段往往出現(xiàn)在材料結(jié)冰的過程中，那么伴隨著這樣一個結(jié)冰的過程，往往會產(chǎn)生以下的風(fēng)險。1.溶液的影響當(dāng)冰晶在凍結(jié)的水中形成的時候，溶液中的溶質(zhì)便會析出，液體中會形成很高的溶解物濃度，從而會導(dǎo)致生物材料所處的環(huán)境的滲透壓升高...

用以下方法凍存細(xì)胞:4℃放置15-30分鐘（一定不能省略該步驟，否則凍存液無法完全滲透過細(xì)胞膜進入細(xì)胞起保護作用）①緩速降溫方法（以使用需異丙醇的Nalgene程序降溫盒為例，冷凍細(xì)胞的過程中可以輔助實現(xiàn)緩慢降溫，以達(dá)到近似于1℃/分鐘）：-80℃過夜→液氮長...

細(xì)胞凍存的操作步驟是什么配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；離心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶，加入適量配...

冷凍保護劑甘油或二甲基亞砜（DMSO）分子量小、溶解度大、細(xì)胞膜通透性好，可以使冰點下降，提高細(xì)胞膜對水的通透性，且對細(xì)胞無明顯毒性。DMSO能夠快速穿透細(xì)胞膜進入細(xì)胞，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細(xì)胞膜通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從...

在選擇轉(zhuǎn)染方法時，需考慮您希望輸送的運載物（DNA、RNA或蛋白質(zhì)）以及您希望轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型。您可通過下表選擇各類陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑和Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。 我們提供了各種DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA輸送選擇，讓您可以對自己的結(jié)...

圖7.對注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進行血液化學(xué)分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復(fù)合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體...

基于陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進入細(xì)胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，前者細(xì)胞毒性相對較大，后者細(xì)胞毒性較小，但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)...

產(chǎn)生慢***的比較 通過 LipoD293? 試劑（升級版）和 Lipofectamine LTX（LTX）試劑將三個 cDNAs 共轉(zhuǎn)染進 293T 細(xì)胞。一個 GFP 載體，pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用來測定慢***的滴度。在 2...

Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進、高效的siRNA輸送解決方案。目前尚無其他siRNA轉(zhuǎn)染試劑能夠在***的細(xì)胞系中（包括常見細(xì)胞類型、干細(xì)胞、原代細(xì)胞以及歷來難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型）提供如此簡便、高效的siRNA輸送效果。 高效 ...

轉(zhuǎn)染試劑-Advanced DNA RNA 西安中團生物 ...

胞因素用低代數(shù)的細(xì)胞293T細(xì)胞非常重要！！當(dāng)然也要保證細(xì)胞狀態(tài)特別好，沒有細(xì)微污染，鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細(xì)胞才可以產(chǎn)生較高滴度的***哦！ 載體系統(tǒng)在實驗中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質(zhì)粒系統(tǒng)、四質(zhì)粒系統(tǒng)，當(dāng)然使用三質(zhì)粒系統(tǒng)的小伙伴居多，一定要...

十全十美難，十全九美卻可以通過選擇一款好的轉(zhuǎn)染試劑來實現(xiàn)。理想的轉(zhuǎn)染試劑包括要具有較高的轉(zhuǎn)染效率，細(xì)胞毒性低，操作簡單可重復(fù)，價格還要可愛。現(xiàn)在大多數(shù)實驗室用的是脂質(zhì)體系列轉(zhuǎn)染試劑，但脂質(zhì)體對細(xì)胞毒性大，某些細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率還很低，看單孔的價格也很不美好。尤其是...

轉(zhuǎn)染是將外源核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程，是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具，也是大部分的生物和分子生物領(lǐng)域的科研黨們繞不開的話題。然而常常聽到的抱怨是"轉(zhuǎn)染效率太低""轉(zhuǎn)染完細(xì)胞全漂了""轉(zhuǎn)染后忘記給細(xì)胞換液了"，真所謂辛辛苦苦實驗N多回，一夜回到解放前……眾所周知...

細(xì)胞冷存液***頭輕柔吹打混勻,Z成細(xì)胞懸液。4.將離心管中的細(xì)胞懸液分裝與細(xì)胞凍存管中，每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細(xì)胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩(wěn)定凍存數(shù)年。6.如若長期保存，可在次日轉(zhuǎn)移至液氮中。操作步驟:細(xì)胞復(fù)蘇：1.從-80℃冰箱或液氮中...

一些凍存液能夠通過降低某種溶液或者物質(zhì)的玻璃化溫度，使溶液在玻璃化的過程中仍保持一定的流動性。很多的凍存液也能通過氫鍵的形成來發(fā)揮作用（由于將水分子替物材料能夠保持原始的生理結(jié)構(gòu)和功能，這種保存方法主要用于低濕休眠。2.多種混合的凍存液含有更少的細(xì)胞毒性，通常...

細(xì)胞冷凍的原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成...

細(xì)胞凍存簡介生物醫(yī)學(xué)科研實驗1、培養(yǎng)室實驗準(zhǔn)備工作大致同細(xì)胞傳代培養(yǎng)的前6個步驟。簡言之：用紫外消毒等消毒超凈工作臺面；清洗消毒手部；觀察細(xì)胞；預(yù)熱培養(yǎng)用液；點燃酒精燈；取出巴斯德吸管、刻度吸管等插在無菌試管內(nèi)。凍存液的配置方法：按如下比例配置：10%甘油+9...

細(xì)胞冷凍的原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成...

解凍解凍后，應(yīng)該立即鋪板在預(yù)先包被好的培養(yǎng)皿中。開始之前，提前準(zhǔn)備好以下材料：試管，恢復(fù)至室溫的培養(yǎng)基，預(yù)先包被的培養(yǎng)板，確保整個解凍復(fù)蘇程序可以在**短的時間內(nèi)完成。注意：不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基。1.在37°C水浴中快速解凍，持續(xù)溫和的在水中晃動凍存...

3、步驟：（1）冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。（2）配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜（DMSO）至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。（3）離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加...

細(xì)胞類型：源于人多能干細(xì)胞的神經(jīng)祖細(xì)胞（NPCs）用于凍存在神經(jīng)誘導(dǎo)后的任何時間通過STEMdiffTM神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)生成的NPCs解凍復(fù)蘇的NPCs具有可重復(fù)性的高回收率，表型正常，且保持了可擴增及分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和其它神經(jīng)細(xì)胞類型的潛能產(chǎn)品信...

脫水當(dāng)生物材料處于上述條件（2）的情況下，細(xì)胞脫水則會開放相關(guān)壓力對細(xì)胞直接傷害的“大門”。4.細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成雖然一些***或組織能夠耐受細(xì)胞外的冰晶，但是在凍存過程的中如果在細(xì)胞內(nèi)形成了任何微小冰晶時對細(xì)胞來說都是致命的。凍存液凍存保護劑（cryoprot...

細(xì)胞凍存概念：細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)...

細(xì)胞凍存的操作步驟是什么配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；離心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶，加入適量配...