總RNA的定義:總RNA=mRNA+tRNA+rRNA,即:總RNA就是指mRNA、tRNA、rRNA的總和。這是在還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)lncRNA等microRNA的時(shí)候的概念。但是卻被各大公司默認(rèn)的概念,一直延續(xù)至今。所以各位可以去各大公司的網(wǎng)站,看一看總RNA提取試劑盒案例提供的RNA電泳圖,只有表示總RNA的2條帶——28s和18s;表示microRNA的5s帶,要不沒(méi)有,要不很弱。那么mRNA在哪里呢?從RNA電泳圖上能不能看到呢?真正成熟的mRNA,主要集中在28s和18s之間和上下的熒光背景(一般每條基因mRNA量很少,所以,整體一般看不到明顯帶,只表現(xiàn)為28s和18s中間和上下的連續(xù)的涂...
RNA提取試劑盒原理:該EpiQuik?總RNA提取試劑盒提供了一種快速,簡(jiǎn)單,經(jīng)濟(jì)有效的方法,可從全血,哺乳動(dòng)物細(xì)胞,細(xì)菌細(xì)胞和菌類細(xì)胞中分離總RNA。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時(shí)使污染物通過(guò)柱被有效地洗去。純的RNA用RE緩沖液洗脫,不用酚提取或醇沉淀。RNA提取試劑盒特點(diǎn):1、快速程序在25-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA。2、即用型RNA,可在絕大多數(shù)下游應(yīng)用,例如RT-PCR,cDNA合成,NorthernBlotting,Differentialdisplay,PrimerExtension...
細(xì)胞RNA提取的方法:實(shí)驗(yàn)提取步驟:標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機(jī)溶劑,有效的使有機(jī)相和無(wú)機(jī)相迅速分離。有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進(jìn)入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機(jī)輕輕拿出EP管,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時(shí)候一定要?jiǎng)幼?..
石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒(離心柱型):原理簡(jiǎn)介:改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA(RNA)從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了...
RNA提取注意事項(xiàng):所有實(shí)驗(yàn)所用的泵頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的;整個(gè)過(guò)程要在無(wú)RNase污染的條件下進(jìn)行,通??梢栽跓o(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并用75%的酒精進(jìn)行擦拭殺菌,如有必要也可在實(shí)驗(yàn)前噴灑一些商用的RNase壓制劑;所有相關(guān)溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水(包括75%酒精也需要用無(wú)水乙醇與DEPC水配制);溶液的配制使用移液器進(jìn)行操作,切勿使用量筒等中間器皿;研缽、研棒、鑷子、剪刀等用錫箔紙包好后,200℃干熱滅菌4h;實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定要戴手套和口罩;異丙醇、氯仿、乙醇等試劑要使用未開(kāi)封的,或者開(kāi)封之后直接分裝至小容量離心管的,以避免多次使用的交叉污染...
RNA提取試劑注意事項(xiàng):1、需自備氯仿,異丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。2、所有離心管,泵頭及相關(guān)溶液都必須無(wú)RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時(shí)以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過(guò)夜,然后滅菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級(jí)水中,處理過(guò)夜,滅菌即成DEPC水。3、使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過(guò)程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會(huì)被釋放出來(lái)并剪切樣品。如果不能及時(shí)抽提R...
拭子RNA提取試劑的選擇?操作簡(jiǎn)便性。操作簡(jiǎn)便性也是拭子RNA提取試劑選擇的一個(gè)重要因素。操作過(guò)于復(fù)雜,不光費(fèi)時(shí)費(fèi)力,還容易導(dǎo)致樣本間的交叉污染,也容易損失樣本。特別是用于臨床檢測(cè)或樣本量較多情況下的檢測(cè),操作復(fù)雜如果導(dǎo)致交叉污染會(huì)引起誤診,還會(huì)影響出檢測(cè)報(bào)告的時(shí)間。因而,選用操作簡(jiǎn)便、流暢的提取試劑盒非常重要。就我們?cè)?jīng)用過(guò)的以上三種提取試劑盒來(lái)說(shuō),Q公司的拭子RNA提取試劑盒提取過(guò)程大約25min,從樣本處理開(kāi)始需要10個(gè)步驟;T公司拭子RNA提取試劑盒整個(gè)提取過(guò)程需要1個(gè)多小時(shí),從樣本開(kāi)始處理10個(gè)步驟;B公司的Biog拭子RNA提取試劑盒提取過(guò)程大約20min,從樣本開(kāi)始處理7個(gè)步驟,...
RNA提取關(guān)鍵點(diǎn)病菌RNA在提取后也仍然具有傳染性,在提取時(shí),實(shí)驗(yàn)人員需要佩戴口罩和手套等各種防護(hù)裝備,以防實(shí)驗(yàn)室污染。而有種「自動(dòng)滅活」的方法,在更加便利的同時(shí),也能更好的保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員的安全。許多樣品中含有高水平的RNase,這種酶也會(huì)加速RNA的降解。為了使這種酶對(duì)降解的影響較小化,較好在采集時(shí)就穩(wěn)定好樣本中的RNA。這種情況下,可以在裂解緩沖液中立即進(jìn)行溶解。比如可以通過(guò)TRIzol?、RNA裂解緩沖液等使RNase失活,然后再處理樣本。另外,再采集樣本之后馬上加入DNA/RNAShield,可以快速降解掉RNase等蛋白物質(zhì)。當(dāng)然,DNA/RNAShield也會(huì)保證取樣時(shí)微生物基因多樣...
細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):1.有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,與細(xì)胞核RNA。2.方便快捷的離心柱操作方式。3.提取的RNA,品質(zhì)高,產(chǎn)量多。4.試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA(含MicroRNA)。5.純化的RNA可用于任何應(yīng)用,包括RT-PCR,qRT-PCR,RNA-Seq,陣列等。6.細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR。7.試劑盒可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者組織樣品的提取。在某些情況下,研究者們更希望能夠提取特定分餾的RNA,而不是總RNA。例如,在一些表達(dá)譜研究中,較好能夠提取成熟的細(xì)胞質(zhì)(Cytoplasmic)RNA?;蛘?,在研究分析未剪接的RNA前...
法爾和梅洛的發(fā)現(xiàn)??茖W(xué)家在矮牽?;▽?shí)驗(yàn)中所觀察到的奇怪現(xiàn)象,其實(shí)是因?yàn)樯矬w內(nèi)某種特定基因“沉默”了。導(dǎo)致基因“沉默”的機(jī)制就是RNA干擾機(jī)制。此前,RNA分子只是被當(dāng)作從DNA(脫氧核糖核酸)到蛋白質(zhì)的“中間人”、將遺傳信息從“藍(lán)圖”傳到“工人”手中的“信使”。但法爾和梅洛的研究讓人們認(rèn)識(shí)到,RNA作用不可小視,它可以使特定基因開(kāi)啟、關(guān)閉、更活躍或更不活躍,從而影響生物的體型和發(fā)育等。諾貝爾獎(jiǎng)評(píng)審會(huì)在評(píng)價(jià)法爾和梅洛的研究成果時(shí)說(shuō):“他們的發(fā)現(xiàn)能解釋許多令人困惑、相互矛盾的實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果,并揭示了控制遺傳信息流動(dòng)的自然機(jī)制。這開(kāi)啟了一個(gè)新的研究領(lǐng)域?!奔?xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):細(xì)胞質(zhì)R...
RNA提取注意事項(xiàng):所有實(shí)驗(yàn)所用的泵頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的;整個(gè)過(guò)程要在無(wú)RNase污染的條件下進(jìn)行,通??梢栽跓o(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并用75%的酒精進(jìn)行擦拭殺菌,如有必要也可在實(shí)驗(yàn)前噴灑一些商用的RNase壓制劑;所有相關(guān)溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水(包括75%酒精也需要用無(wú)水乙醇與DEPC水配制);溶液的配制使用移液器進(jìn)行操作,切勿使用量筒等中間器皿;研缽、研棒、鑷子、剪刀等用錫箔紙包好后,200℃干熱滅菌4h;實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定要戴手套和口罩;異丙醇、氯仿、乙醇等試劑要使用未開(kāi)封的,或者開(kāi)封之后直接分裝至小容量離心管的,以避免多次使用的交叉污染...
提取RNA的詳細(xì)步驟:首先,將研缽晾干夠,倒入1/3體積的液氮,加入0.2g均質(zhì)的植物材料,充分研磨后轉(zhuǎn)入一個(gè)含有300微升GMT的1.5ml的離心管中,搖勻。然后,加入30微升2mol/lNaAc進(jìn)行搖勻,加入300微升酸酚搖勻,加入100微升的氯仿?lián)u勻。然后,在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,吸取上清液的3/4,加入等體積的異丙醇,于冰上放置十五分鐘。然后,在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中,于-20攝氏度下放置過(guò)夜。然后,在4攝氏度13000r/min下離心10-15min,將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,...
游離RNA(或稱循環(huán)RNA,cell-freeRNA,簡(jiǎn)稱cfRNA),即存在于細(xì)胞外的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,包括mRNA和RNA,在人的多種體液中被普遍研究并成為疾病無(wú)創(chuàng)性診斷和研究的新分子標(biāo)志物。文獻(xiàn)總結(jié)了以下兩個(gè)方面,一方面游離RNA主要來(lái)源于tumour細(xì)胞,另一方面tumour細(xì)胞來(lái)源有凋亡、壞死、主動(dòng)釋放三種機(jī)制,目前認(rèn)為以凋亡為主。游離RNA的生物學(xué)特征:游離RNA的結(jié)構(gòu)RNA相對(duì)DNA而言,更易被普遍存在的核糖核酸酶所降解,而且病癥患者血清中含有更高濃度的核糖核酸酶,病癥患者血清中以RNA-蛋白脂復(fù)合物化學(xué)組成來(lái)保護(hù)RNA,半衰期大約為2天。本試劑盒采用獨(dú)特的配方和添加劑,能高效的分離血清...
拭子RNA提取試劑的選擇?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,也可通過(guò)增加樣本量來(lái)實(shí)現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國(guó)內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來(lái)回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求血漿/血清RNA提取試劑盒:總RNA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。天津RNA...
拭子RNA提取試劑的選擇?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,也可通過(guò)增加樣本量來(lái)實(shí)現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國(guó)內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來(lái)回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求總RNA提取試劑:適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織。寧波RNA提取試劑廠家推薦通用多糖多酚...
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡(jiǎn)介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免...
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無(wú)色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無(wú)蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、Re...
RNA指的是核糖核酸。真核生物體的遺傳物質(zhì)存在于細(xì)胞核內(nèi),多數(shù)的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來(lái)作為遺傳的中心物質(zhì),但是少量的病菌遺傳物質(zhì)可以是RNA。正因?yàn)椴【倪z傳物質(zhì)是RNA,所以可以通過(guò)檢測(cè)病菌的RNA是否存在,或者其濃度和含量來(lái)判斷是否存在相應(yīng)的病菌傳染,傳染的程度及病菌是否仍在大量復(fù)制。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤、G鳥(niǎo)嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。RNA是核糖核酸的縮寫。存在于生物細(xì)胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長(zhǎng)鏈狀分子。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許...
核糖核酸(縮寫為RNA,即RibonucleicAcid),存在于生物細(xì)胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長(zhǎng)鏈狀分子。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種,即A(腺嘌呤)、G(鳥(niǎo)嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。核糖核酸在體內(nèi)的作用主要是引導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。人體一個(gè)細(xì)胞含RNA約10pg(含DNA約7pg)。與DNA相比,RNA種類繁多,分子量較小,含量變化大。RNA可根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核...
細(xì)胞外RNA(exRNA)已成為研究界的新寵。近年來(lái),人們?cè)谘獫{或血清樣本中成功檢測(cè)到疾病相關(guān)的exRNA,使其有望成為非侵入性的生物標(biāo)志物。然而,從血漿或血清中分離exRNA仍頗具挑戰(zhàn)性,這一方面是因?yàn)閑xRNA豐度低,另一方面是因?yàn)檠褐械奈廴疚飼?huì)壓制PCR。商品化的試劑盒能簡(jiǎn)化和加速exRNA提取過(guò)程,已成為循環(huán)exRNA研究不可缺少的工具。然而,這些試劑盒的提取效率如何,是否能去除血漿中的污染物,是否會(huì)偏向特定的RNA,都沒(méi)有經(jīng)過(guò)評(píng)估,而這類評(píng)估對(duì)于結(jié)果解釋和實(shí)驗(yàn)之間的比較都很關(guān)鍵。總RNA提取試劑,適用于動(dòng)植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提,可有效防止RNA在提取過(guò)程中的降解。廈門重...
BIOG血液RNA快速提取試劑盒:BIOG血液RNA快速提取試劑盒是我公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在綜合比較了國(guó)外同類較好產(chǎn)品的基礎(chǔ)上反復(fù)研制優(yōu)化而成,專門用于血液RNA的快速提取純化。本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液配方,可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的RNA,操作簡(jiǎn)便快速,只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高,可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,裂解液和洗脫液經(jīng)過(guò)多次優(yōu)化,有效地去除了蛋白、色素、脂類等雜質(zhì)污染,特別適用于血液包括細(xì)菌、病菌等傳染的分子檢測(cè)。植物RNA提取試劑:提取的總RNA純度極高,沒(méi)有蛋白和其他雜質(zhì)的污...
RNA提?。侯A(yù)備工作RNA酶(Rnase)是導(dǎo)致RNA降解較主要的物質(zhì)。此酶非常穩(wěn)定,在一些極端的條件下只可暫時(shí)失活,但限制因素去除后又迅速恢復(fù)活性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白壓制劑不能使所有的Rnase完全失活。1.它普遍存在于人的皮膚上,因此制備RNA時(shí)必須戴手套。2.RNase的又一污染源是取液器。根據(jù)取液器制造商的要求對(duì)取液器進(jìn)行處理。一般情況下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部,可基本達(dá)到要求。3.塑料制品、玻璃和金屬物品的處理。RNA提?。簾o(wú)論是從細(xì)胞、血液、還是組織等高難度樣本提取RNA。南京武漢RNA提取試劑昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到...
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過(guò)程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開(kāi)發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級(jí)代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒特點(diǎn):操作簡(jiǎn)單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲(chóng)中的多糖污染。適用于各種昆蟲(chóng)組織,每100mg組織能提取到20~30μg總R...
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法,異硫氰酸胍法操作簡(jiǎn)單快捷,適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織;Trizol法裂解能力較強(qiáng),尤其適合小樣本及特別難提取的組織,如兔子皮膚,動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提取;另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑,還可以用于植物組織、細(xì)菌、菌類等組織的提取。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問(wèn)題是:(1)RNA產(chǎn)量較低;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染;(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染;(4)樣品降解等問(wèn)題。總RNA提取試劑:提取的總RN...
經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA:這個(gè)事實(shí)可能會(huì)刷不少新手甚至老手的三觀,但確有實(shí)驗(yàn)支持:經(jīng)典Trizol法會(huì)選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點(diǎn),源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國(guó)鼎鼎大名的美女科學(xué)家,專做RNA相關(guān)的研究,包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的“現(xiàn)象”,即貼壁細(xì)胞在消化之后,會(huì)有一些miRNA的豐度突然降低,看起來(lái)好像是被快速“降解”掉了,并據(jù)此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn),這個(gè)“現(xiàn)象”難以重復(fù):如果用Trizol做實(shí)驗(yàn),就一定是陽(yáng)性結(jié)果,而用試劑盒提RNA,就重復(fù)不出來(lái)。難道是號(hào)稱能提總RNA的Trizol方案...
新型土壤總RNA快速提取試劑盒:獨(dú)特裂解劑/裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,然后將粗純化的玻璃奶轉(zhuǎn)移到離心柱,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn):離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。兼容性強(qiáng),適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。快速,簡(jiǎn)捷,單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。多次柱漂洗確保...
miRNA是一類內(nèi)源性的約22個(gè)核苷酸的非編碼RNA分子,可參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。在細(xì)胞的分化和發(fā)育,細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和對(duì)傳染的應(yīng)答等生物學(xué)過(guò)程中,miRNA發(fā)揮了重要作用。成熟的miRNA主要通過(guò)翻譯壓制來(lái)調(diào)控內(nèi)源性基因的表達(dá)。miRNA的應(yīng)用有miRNA模擬物和壓制劑。miRNA模擬物是化學(xué)合成的雙鏈RNA分子,通過(guò)傳染到細(xì)胞中,模擬成熟的內(nèi)源性miRNA分子;miRNA壓制劑是單鏈經(jīng)過(guò)修飾的RNA分子,通過(guò)傳染到細(xì)胞中,特異性的壓制miRNA的功能。miRNA模擬物和壓制劑可以用于研究單個(gè)miRNA錯(cuò)誤調(diào)節(jié)所造成的生物學(xué)影響,也能用于確定某個(gè)miRNA分子的特異性靶標(biāo)基因。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)mi...
在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場(chǎng)所。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,像是組成剪接體的snRNA,負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過(guò)程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶...
RNA提取試劑的選擇:對(duì)于富含多糖多酚的植物類組織提取是個(gè)難點(diǎn),Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個(gè)問(wèn)題。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡(jiǎn)單的植物組織材料(葉片、莖、幼苗等)、富含多糖多酚的植物組織材料(果實(shí)、種子等)、菌類提取高純度的TotalRNA,適用范圍普遍。按照標(biāo)準(zhǔn)流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(
安德魯·法爾稱:“克雷格和我的工作是研究為什么一些基因會(huì)停止運(yùn)行,我們?cè)噲D去控制它們,我們發(fā)現(xiàn)了一些東西可以有效地中止它們。這些基因并不能告訴你它們能做什么,所以如果你能中止它們,你就可以開(kāi)始了解它們能做什么。不過(guò),較初發(fā)現(xiàn)RNA現(xiàn)象的是一位華人學(xué)者,非常可惜,他沒(méi)有進(jìn)一步弄清這是為什么。”二人發(fā)現(xiàn)的是一個(gè)有關(guān)控制基因信息流程的關(guān)鍵機(jī)制。人們的基因組通過(guò)從細(xì)胞核里的DNA向蛋白質(zhì)的合成機(jī)制發(fā)出生產(chǎn)蛋白質(zhì)的指令,這些指令通過(guò)mRNA傳送。他們發(fā)現(xiàn)一種可以用特定基因降解mRNA的方式,在這種RNA干擾現(xiàn)象中,雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。這項(xiàng)技術(shù)被用于全球的實(shí)驗(yàn)室來(lái)確定在各種病癥中...