生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心，簡(jiǎn)化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出。廣州正規(guī)鼠尾膠原鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋...

要準(zhǔn)備的器具：組織剪2把，有齒鑷1把，無齒鑷1把，200ml燒杯1個(gè)，培養(yǎng)皿1個(gè)，帶蓋廣口瓶1個(gè)，離心管、小瓶數(shù)個(gè)，滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1％醋酸溶液。經(jīng)44.48N10min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液。取大鼠尾巴，洗凈，置75%酒精浸泡消毒后，手持尾巴，用止血鉗夾住尾巴較高，折斷尾骨后拉出尾腱，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中，稱尾腱的重量，按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液，搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置48小時(shí)，離心。吸取其上清，分裝至小瓶，4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。用無菌0...

膠原蛋白的功效：1.膠原蛋白可以作為一種補(bǔ)鈣食品，膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運(yùn)輸鈣到骨細(xì)胞的運(yùn)載工具，骨細(xì)胞中的骨膠原是羥基磷灰石的粘合劑，它與羥基磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此，只要攝入足夠的膠原蛋白，就能保證正常機(jī)體鈣質(zhì)的攝入量，膠原蛋白可制成補(bǔ)鈣的保健食品。2.膠原蛋白在人體運(yùn)動(dòng)鍛煉的過程中，可以促使身體消耗大量脂肪達(dá)到的效果。但需要注意的是膠原蛋白本身是沒有作用的，它只能在運(yùn)動(dòng)呢鍛煉是增加脂肪的消耗量。3.膠原蛋白是身體免疫作用中負(fù)責(zé)重要功能的阿米巴細(xì)胞清掃異物的感知器，因此對(duì)預(yù)防疾病很有幫助。可提高免疫機(jī)能、克制細(xì)胞、活化細(xì)胞機(jī)能、活化筋骨、治好關(guān)節(jié)炎及酸痛。鼠尾膠原醋...

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí)，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料。鄭州正規(guī)鼠...

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接...

鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接...

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機(jī)礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要。因此，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，...

膠原蛋白的提取方法：酶法提取：酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解，水解條件溫和，反應(yīng)速率快，提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu)，蛋白純度高，理化性質(zhì)穩(wěn)定，且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復(fù)合酶。工藝可選擇一步法，即利用酶液直接提??；二步法，即先用酸或者堿進(jìn)行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預(yù)處理革屑，然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白，探討了酶和酶的加入量對(duì)提取結(jié)果的影響，給出了酶對(duì)膠原...

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4....

鼠尾膠原：含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。加入760μL的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性...

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4....

鼠尾膠原蛋白等實(shí)驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用：干細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種「難伺候」的細(xì)胞，以及一些組織在體外培養(yǎng)時(shí)，需要在模擬體內(nèi)環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)中生長(zhǎng)，膠原蛋白和纖粘蛋白正是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成部分，富含1型膠原蛋白大鼠尾部也成了實(shí)驗(yàn)室用膠原蛋白的較主要來源。鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的。它可以用于監(jiān)測(cè)小鼠血液成分的變化，確認(rèn)小鼠是否患上了糖尿病或者某些治好能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血，實(shí)驗(yàn)用鼠尾尖取血的取血量較小，但取血之后，小鼠還能繼續(xù)下一步建?；蛘邔?shí)驗(yàn)，完全沒有性命之憂。制備鼠尾膠原：離心，4000轉(zhuǎn)/分，10-15分鐘。無錫正...

膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成。在人的身體中這是皮膚、筋、軟骨、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì)。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一，不論來源于哪一種動(dòng)物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸，有脯氨酸和羥脯氨酸。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別，膠原蛋白分為20幾個(gè)亞型。但較為常見的為Ι、Π、ΙΙΙ型膠原蛋白，即間質(zhì)膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良。鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便。金華唐山鼠尾膠原鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的...

鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法。方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技術(shù)測(cè)量纖毛擺動(dòng)頻率。結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接;同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動(dòng)頻率是相同的;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動(dòng)頻率是相同的。結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體...

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心，簡(jiǎn)化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料。膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網(wǎng)，它會(huì)牢牢地留住就要流失的鈣質(zhì)。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家鼠尾膠原，10mg包裝，配制方法如下：1.配0.1M的乙酸...

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。廣州鼠尾膠原價(jià)格膠原蛋白的功效與作用：1、膠原蛋白中含有大量甘氨酸，在人體內(nèi)不僅參與合成膠原，而且還是大腦細(xì)胞中是一...

膠原蛋白的功效與作用：可以預(yù)防心血管病。研究表明，膠原蛋白可以降低血甘油三酯和膽固醇，并可增高體內(nèi)某些缺乏的必需微量元素，從而使其維持在一個(gè)相對(duì)正常的范圍之內(nèi)，是一種理想的降血脂食品。此外，膠原蛋白在協(xié)助機(jī)體排出鋁質(zhì)，減少鋁質(zhì)在體內(nèi)聚集方面也有獨(dú)特之處。鋁對(duì)人體有害，研究表明，日前逐漸增多的老年癡呆癥與鋁的攝入量有關(guān)，同時(shí)膠原蛋白有加速血紅蛋白和紅細(xì)胞生成的功效，它具有改善循環(huán)、對(duì)、缺血性腦病有利。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用。成都正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1MN...

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。武漢鼠尾膠原哪家好利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分...

簡(jiǎn)介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備，純度達(dá)到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞，貼壁及生長(zhǎng)正常。4、本品濃度1mg/mL，pH7.0時(shí)形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠，NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長(zhǎng)正常、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長(zhǎng)...

要準(zhǔn)備的器具：組織剪2把，有齒鑷1把，無齒鑷1把，200ml燒杯1個(gè)，培養(yǎng)皿1個(gè)，帶蓋廣口瓶1個(gè)，離心管、小瓶數(shù)個(gè)，滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1％醋酸溶液。經(jīng)44.48N10min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液。取大鼠尾巴，洗凈，置75%酒精浸泡消毒后，手持尾巴，用止血鉗夾住尾巴較高，折斷尾骨后拉出尾腱，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中，稱尾腱的重量，按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液，搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置48小時(shí)，離心。吸取其上清，分裝至小瓶，4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。4°C沉...

鼠尾膠原蛋白的用途是什么：在工業(yè)應(yīng)用方面，鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的內(nèi)部涂層。設(shè)備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥。它還可以用來制造一種凝膠，可當(dāng)作懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基。此外，還可以把它當(dāng)膠水使用。在化妝品行業(yè)，鼠尾膠原蛋白可當(dāng)作沐浴液和肥皂中的凝膠。它還用于生產(chǎn)能減少皺紋和改善皮膚質(zhì)量的面霜或護(hù)膚霜。不過，用于撫紋，或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從?；蜇i提取。不過，用于撫紋，或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從?；蜇i提取。使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對(duì)初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解。杭州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家膠原蛋白的功效與作用：一提起膠原蛋白，女性朋友們眼睛都放...

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。1mg/ml濃度以上，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來...

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用：在國外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細(xì)胞,以3...

鼠尾膠原：鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑。實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原（兩個(gè)同學(xué)一組操作）。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。制備鼠尾膠原：1、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘；2、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的，折斷尾骨后拉出尾腱；3、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡；4、重復(fù)步驟2、3，直至尾腱量夠用；5、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）；6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中；7...

鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來源之一。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin、CD31...

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：兩組培養(yǎng)皿中，隨著過氧化氫濃度的增高，均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重，細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降，細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高，Bcl-2/Bax比值明顯降低，呈劑量依賴性。而在相同濃度過氧化氫誘導(dǎo)下，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯減弱，細(xì)胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高，細(xì)胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低。表明鼠尾膠原對(duì)過氧化氫所致的心肌細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與提高超氧化物歧化酶活力，減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。方法制作鼠尾膠原，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼...

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開，去掉皮毛，并剪成小段，抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存。論鼠尾膠原能...

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測(cè)鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130000附近有明顯條帶，另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察。鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中。武漢正...

簡(jiǎn)介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備，純度達(dá)到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞，貼壁及生長(zhǎng)正常。4、本品濃度1mg/mL，pH7.0時(shí)形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠，NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長(zhǎng)正常、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長(zhǎng)...

鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來源之一。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin、CD31...